中国医科大学学报  2018, Vol. 47 Issue (9): 797-802

文章信息

徐国帅, 蔡相军, 陈江波, 吕庆, 刘洪涛
XU Guoshuai, CAI Xiangjun, CHEN Jiangbo, LÜ Qing, LIU Hongtao
AEG-1和CHD5在胃癌中的表达及其临床意义
AEG-1 and CHD5 Expressions in Gastric Cancer and Their Clinical Significance
中国医科大学学报, 2018, 47(9): 797-802
Journal of China Medical University, 2018, 47(9): 797-802

文章历史

收稿日期:2018-02-23
网络出版时间:2018-08-28 8:56
AEG-1和CHD5在胃癌中的表达及其临床意义
徐国帅1,2 , 蔡相军1,2 , 陈江波1,2 , 吕庆1 , 刘洪涛1     
1. 中国人民解放军第202医院普通外科, 沈阳 110812;
2. 中国医科大学研究生院, 沈阳 110122
摘要目的 检测AEG-1和CHD5在胃癌组织及癌旁组织中的表达,探讨两者的表达与胃癌临床病理特征和预后之间的关系。方法 采用免疫组化方法检测58例胃癌组织及其癌旁组织中AEG-1和CHD5的表达情况。结果 AEG-1在胃癌组织中高表达(43/58,74.14%),CHD5在癌旁组织中高表达(41/58,70.69%)。AEG-1的表达与患者的TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和Lauren分型密切相关(P < 0.05);CHD5的表达与患者的肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移密切相关(P < 0.05)。AEG-1与CHD5蛋白表达水平呈现显著的负相关(r=-0.595,P < 0.001)。生存分析显示,AEG-1高表达组5年生存率显著低于低表达组,而CHD5高表达组5年生存率显著高于低表达组。多因素分析显示,TNM分期、肿瘤分化程度、AEG-1与CHD5表达情况是影响胃癌患者预后的独立危险因素。结论 AEG-1和CHD5与胃癌的侵袭和转移关系密切,可能为胃癌患者提供新的预测指标和治疗靶点。
关键词AEG-1    CHD5    胃癌    预后    免疫组化    
AEG-1 and CHD5 Expressions in Gastric Cancer and Their Clinical Significance
1. Department of Surgery, 202 Hospital of PLA, Shenyang 110812, China;
2. Graduate School, China Medical University, Shenyang 110122, China
Abstract: Objective To assess AEG-1 and CHD5 expressions in gastric cancer and adjacent tissues and explore the correlation between AEG-1 expression and its clinicopathological characteristics and prognosis in patients with gastric cancer. Methods Immunohistochemistry was performed to assess AEG-1 and CHD5 expressions in 58 gastric cancer tissues and their adjacent tissues. Results AEG-1 is highly expressed in gastric cancer tissues(43/58, 74.14%), whereas CHD5 is highly expressed in adjacent tissues(41/58, 70.69%). AEG-1 expression was closely related to the TNM stage, depth of tumor invasion, lymph node metastasis, and Lauren's classification(P < 0.05). CHD5 expression was closely related to the degree of differentiation, TNM stage, and lymph node metastasis(P < 0.05). The expression level of AEG-1 protein was significantly and negatively correlated with that of CHD5 protein(r=-0.595, P < 0.001). Survival analysis showed that the 5-year survival rate of the AEG-1 overexpression group was significantly lower than that of the AEG-1 low-expression group, whereas the 5-year survival rate of the CHD5 overexpression group was higher than that of the CHD5 low-expression group. Multivariate Cox regression analysis revealed that the TNM stage, tumor differentiation, AEG-1 expression, and CHD5 expression were independent prognostic risk factors in patients with gastric cancer. Conclusion AEG-1 and CHD5 are closely related to the invasion and metastasis of gastric cancer, which provide a new prognostic indicator for survival and therapeutic targets in patients with gastric cancer.
Keywords: AEG-1    CHD5    gastric cancer    prognosis    immunohistochemistry    

胃癌在恶性肿瘤中的发病率位于第5位,并且是全球癌症相关性死亡的第三大原因[1]。大多数患者诊断出胃癌时已经发生淋巴结转移或者远处转移,还有部分患者经手术治疗后复发,胃癌术后的5年生存率只有30%左右[2]。因此,研究胃癌相关基因,有助于了解胃癌侵袭和转移的机制,可以对胃癌患者进行有效的靶向治疗并延长患者的生存时间。AEG-1首次在感染HIV-1的人胚胎星形胶质细胞中发现[3]。AEG-1能够促进细胞增殖、代谢、迁移、侵袭以及血管生成等,因此AEG-1的表达升高与多种肿瘤的临床分型、分期、转移和复发有关[4-5]CHD5是定位于人染色体lp36的抑癌基因,它能够调节染色质重塑,达到抑制肿瘤发生发展的作用[6]。本研究探讨AEG-1与CHD5在胃癌中的联系,并且研究其表达情况与胃癌患者临床病理特征和术后生存率的关系,为胃癌患者提供新的预测生存率的指标和治疗靶点。

1 材料与方法 1.1 标本来源

选取中国人民解放军第202医院普外科胃肠病区2012年1月至2013年1月收治的病历资料完整详细且病理确定为胃癌的患者58例。根据病历号,分别获取同一病例癌组织蜡块和癌旁组织蜡块(距离肿瘤边缘 > 5 cm)。全部病例均实施开腹胃癌根治术,术前均未进行放化疗治疗,且征求患者及其家属意见,自愿参与本研究,征得随访同意。其中,男性患者44例,女性患者14例。年龄32~82岁,平均年龄63.05岁,中位年龄63岁。淋巴结转移40例,未转移18例。根据2009年第7版国际抗癌联盟胃癌TNM分期[7]:Ⅰ期15例,Ⅱ期15例,Ⅲ期24例,Ⅳ期4例。分化程度:低分化26例,中分化及高分化32例。Lauren分型:肠型31例,弥漫型27例。肿瘤直径≥5 cm 18例,直径 < 5 cm 40例。

1.2 试剂及仪器

兔抗人AEG-1多克隆抗体(ab45338)与兔抗人CHD5多克隆抗体(ab202132)购自英国Abcam公司。兔SP检测试剂盒(SP-9001)及DAB显色液试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法

采用免疫组化SP法,测定AEG-1和CHD5在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况。标本石蜡块切片,所切标本在75 ℃恒温箱中放置6 h,取出后自然冷却。切片脱蜡、水合,3%过氧化氢溶液消除内源性过氧化物酶,置入高压水浴锅内的枸橼酸钠缓冲液中进行热修复,滴加山羊血清封闭液,静置20 min后,分别滴加AEG-1抗体(1:400)与CHD5抗体(1:100)。阴性对照滴加PBS溶液代替一抗,切片在4 ℃下过夜。复温、洗片后滴加二抗及辣根酶标记链霉卵白素,孵育后滴加显色液,冲洗、苏木素复染、脱水,最后用中性树胶盖片。

1.4 结果判定

由3名病理科医师在400倍的光学显微镜下随机观察5个视野,每个视野要求至少计数100个完整肿瘤细胞。肿瘤细胞胞质中出现棕黄色染色为阳性,以阳性细胞比例得分乘以染色强度得分为最终评判得分。在统计分析中,最终得分≥6分为高表达,< 6分为低表达。阳性细胞比例评分:< 5%为0分,5%~ < 25%为1分,25%~ < 50%为2分,50%~ < 75%为3分,≥75%为4分。染色强度评分:未染色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。

1.5 随访

随访自手术之日开始,术后第1、2年每3个月随访1次,术后3~5年每6个月随访1次。随访方式为门诊复查、电话和微信等方式,随访截止时间为2018年1月2日。

1.6 统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。计数资料应用行×列联表的χ2检验;AEG-1与CHD5的相关性分析应用Spearman相关分析;生存曲线的绘制应用Kaplan-Meier法,其检验方法采用log-rank法;应用Cox比例风险回归模型对胃癌患者进行影响预后的多因素分析。P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 胃癌组织与其对应的癌旁组织中AEG-1与CHD5的表达

AEG-1的染色部位位于细胞质与细胞膜,见图 1;CHD5的染色部位位于细胞质与少量细胞核,见图 2。AEG-1在胃癌组织中与对应的癌旁组织中高表达率分别为74.14%(43/58)和37.93%(22/58);CHD5在胃癌组织中与对应的癌旁组织中高表达率分别为32.76%(19/58)和70.69%(41/58)。在胃癌组织中AEG-1的表达显著高于癌旁组织(χ2=22.356,P < 0.05),而CHD5在癌旁组织中表达明显高于胃癌组织(χ2=16.710,P < 0.05),差异有统计学意义。

A, normal tissues adjacent to cancer; B, gastric cancer. 图 1 AEG-1的表达 ×400 Fig.1 AEG-1 expression ×400

A, normal tissues adjacent to cancer; B, gastric cancer. 图 2 CHD5的表达 ×400 Fig.2 CHD5 expression ×400

2.2 AEG-1与CHD5蛋白表达与胃癌患者临床病例特征的相关性分析

AEG-1蛋白表达水平与患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤直径大小无关(P > 0.05),而与患者的TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、Lauren分型有关(P < 0.05)。CHD5蛋白表达水平与患者性别、年龄、肿瘤直径大小、浸润深度、Lauren分型无关(P > 0.05),而与患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移上有关(P < 0.05)。见表 1

表 1 胃癌患者AEG-1与CHD5在不同病理特征中的表达 Tab.1 AEG-1 and CHD5 expressions in patients with different pathological characteristics of gastric cancer
Clinicopathological features n AEG-1 χ2 P CHD5 χ2 P
+ - + -
Gender
  Male 44 33 11 0.071 0.790 13 31 0.854 0.355
  Female 14 10 4 6 8
Age(year)
  >60 34 23 9 0.540 0.462 12 22 0.240 0.624
  ≤ 60 24 20 6 7 17
Differentiation
  Low 26 17 9 1.883 0.170 5 21 3.915 0.048
  Moderate-high 32 26 6 14 18
Tumor diameter (cm)
  ≥5 20 17 3 1.878 0.171 5 15 0.834 0.361
  <5 38 26 12 14 24
TNM stage
  Ⅰ 15 10 5 10.191 0.017 8 7 8.970 0.031
  Ⅱ 15 11 4 7 8
  Ⅲ 24 19 5 4 20
  Ⅳ 4 3 1 0 4
Infiltration depth
  T1-T2 21 12 9 4.959 0.026 9 12 1.524 0.217
  T3-T4 37 31 6 10 27
Lymphatic metastasis
  Yes 38 32 6 5.831 0.016 9 29 4.120 0.042
  No 20 11 9 10 10
Lauren’s classification
  Intestinal type 31 19 12 5.733 0.017 13 18 2.546 0.111
  Diffuse type 27 24 3 6 21

2.3 胃癌组织中AEG-1与CHD5表达的相关性

胃癌组织中AEG-1高表达43例,低表达15例,CHD5高表达19例,低表达39例。两者均高表达7例,均低表达3例。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织中AEG-1与CHD5蛋白表达水平呈现显著的负相关(r = -0.595,P < 0.001),见表 2

表 2 胃癌组织中AEG-1与CHD5表达的相关性(n Tab.2 Correlation between AEG-1 and CHD5 expressions in gastric cancer(n)
CHD5 AEG-1 Total
+ -
+ 7 12 19
- 36 3 39
Total 43 15 58

2.4 AEG-1与CHD5在胃癌患者中的表达与预后

53例患者随访时间为3~60个月,其中5例患者失访,随访率为91.38%。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,AEG-1高表达组5年生存率为28.95%,AEG-1低表达组5年生存率为73.33%,见图 3。Log-rank检验结果显示,2组间差异有统计学意义(χ2=5.644,P = 0.018)。CHD5高表达组5年生存率为77.78%,CHD5低表达组5年生存率为22.86%,见图 4。log-rank检验结果显示,2组间差异有统计学意义(χ2=7.643,P = 0.006)。

图 3 AEG-1表达水平与胃癌患者的预后关系 Fig.3 Relationship between AEG-1 expression and gastric cancer prognosis

图 4 CHD5表达水平与胃癌患者的预后关系 Fig.4 Relationship between CHD5 expression and gastric cancer prognosis

2.5 Cox比例风险回归模型对胃癌患者生存率影响的多因素分析

应用Cox比例风险回归模型分析患者的年龄、性别、TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移、Lauren分型、AEG-1表达情况和CHD5表达情况8个协变量,发现TNM分期、肿瘤分化程度、AEG-1表达情况与CHD5表达情况是影响胃癌患者预后的独立危险因素。见表 3

表 3 Cox比例风险回归模型对胃癌患者预后影响的多因素分析 Tab.3 Multivariate analysis of the prognosis of patients with gastric cancer by Cox proportional hazard regression model
Item B SE Wald P Exp(B 95% CI
Lower limit Upper limit
Age 0.029 0.019 2.411 0.120 1.030 0.992 1.068
Gender -0.547 0.461 1.407 0.235 0.579 0.235 1.428
TNM stage 1.970 0.557 12.515 0.000 7.174 2.408 21.374
Differentiation 0.050 0.025 4.177 0.041 1.052 1.002 1.104
Lymphatic metastasis -0.585 0.740 0.625 0.429 0.557 0.131 2.377
Lauren’s classification -0.435 0.341 1.623 0.203 0.647 0.332 1.264
AEG-1 2.374 0.791 8.999 0.003 10.742 2.277 50.671
CHD5 1.388 0.598 5.389 0.020 4.006 1.241 12.930

3 讨论

近年来,胃癌的肿瘤分子生物学研究发展迅速,科研人员力求从分子水平阐释胃癌侵袭、转移的发生机制,从而寻求合适的分子生物学指标进行预后评估或者靶向治疗[8-9]。在本研究中,AEG-1在胃癌组织中的高表达率为74.14%,显著高于癌旁正常组织。并且进一步研究发现,AEG-1的表达与患者的TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、Lauren分型有关。因此,AEG-1的异常表达会影响肿瘤细胞增殖、侵袭等生物学行为。这与Wu等[10]的研究结果一致。Wu等[10]发现AEG-1的表达升高与胃癌的转移有关,并且AEG-1能够促进胃癌细胞的上皮-间质转化、迁移和侵袭。还有研究[11]发现,AEG-1在肿瘤坏死因子α的介导下易位到细胞核,与NF-κB的p65亚基相互作用,并作为NF-κB与转录机制间的桥接因子。这种相互作用增强了NF-κB下游基因的转录,导致血管生成、侵袭和转移。

CHD5是人类肿瘤中重要的抑癌基因,在染色质重塑过程中发挥重要作用[12]。本研究发现,CHD5在胃癌组织中呈现低表达,并且其表达情况与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关。因此,CHD5能够诱导肿瘤细胞发生增殖、侵袭、凋亡等行为,进而对肿瘤的发展产生影响。CHD5最重要的信号通路是ARF/P53,p53能够促进细胞凋亡机制的发生,并且起到稳定NF-κB的转录而诱导细胞的凋亡的作用[13]CHD5基因作为ARF/P53通路的上游基因,起到了重要的门户作用,一旦CHD5基因突变或缺失将引起其下游一系列靶基因功能丧失,从而导致肿瘤的发生发展[14]。AEG-1能够激活并促进NF-κB信号通路进行转录,而CHD5则在上游抑制、稳定NF-κB信号通路,这与本研究得出的相关分析结果相同,在胃癌组织中AEG-1与CHD5之间表达情况呈显著负相关(r = -0.595,P < 0.001)。但本研究仍有不足,只探讨了AEG-1与CHD5在NF-κB通路上的关系,在其他信号通路上的关系还尚不清楚,仍需深入研究。

通过随访和生存分析发现,AEG-1高表达组5年生存率明显低于低表达组,CHD5高表达组5年生存率高于低表达组。多因素分析发现,TNM分期、肿瘤分化程度、AEG-1与CHD5的表达情况是影响胃癌患者预后的独立危险因素。这些结果均提示AEG-1和CHD5与胃癌患者预后显著相关,有可能成为一种新的评估胃癌患者预后价值的标志物。

综上所述,胃癌的发生和发展受多种信号通路的影响,是一个复杂而又精密的过程。了解胃癌发生发展的机理,从根本上解决胃癌细胞在分化过程中的关键问题,是改善胃癌患者预后的重要途径。AEG-1和CHD5与胃癌的侵袭、浸润和转移关系密切,联合检测更有利于胃癌的早期诊断及预后判断,有望成为胃癌治疗的新靶点。

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