2018, Vol. 47文章信息
- 李冬阳, 李智, 曲晶磊, 曲秀娟, 刘云鹏
- LI Dongyang, LI Zhi, QU Jinglei, QU Xiujuan, LIU Yunpeng
- NFκB活化受体因子在胃癌中的表达及临床意义
- Expression and Clinical Significance of Receptor Activator of NF-κB in Gastric Carcinoma
- 中国医科大学学报, 2018, 47(10): 881-885, 890
- Journal of China Medical University, 2018, 47(10): 881-885, 890
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文章历史
- 收稿日期：2018-02-23
- 网络出版时间：2018-09-27 16:20
引用本文 |
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，临床病例多以进展期为主[1]，局部及远处转移是胃癌患者生存率低的主要原因。胃癌的侵袭转移是一个涉及肿瘤生物学行为、转移途径、转移器官特征等多重因素的复杂过程。
NF-κB活化受体因子（receptor activator of NF-κB，RANK）是肿瘤坏死因子受体超家族（tumor necrosis factor receptor superfamily，TNFRS）的成员。RANK最初从树突状细胞中克隆出来，被发现和证实在溶骨过程以及淋巴结发育中有重要作用，属于Ⅰ类跨膜蛋白[2-3]。既往研究[4-5]证明，RANK在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤、肾癌等肿瘤细胞表面均有表达。
RANK主要通过RANK/RANKL/OPG通路发挥作用。近年来的研究[6-9]发现，此通路可诱导RANK阳性肿瘤细胞的迁移转移。而RANK在胃癌细胞的表达以及RANK/RANKL/OPG通路能否诱导胃癌细胞迁移在国内外报道较少。
本研究应用免疫组化S-P法，检测RANK蛋白在胃癌中的表达情况，并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及对生存的影响，旨在探讨RANK在胃癌中的表达及临床意义。
1 材料与方法 1.1 临床资料选取中国医科大学附属第一医院2006年4月至2011年12月手术切除的胃癌组织标本232例，术前均未行放疗、化疗及免疫治疗。其中，男166例，女66例。年龄29～80岁，中位年龄60岁。组织学类型均为腺癌，按分化程度分为：中高分化癌110例，低分化癌100例（将印戒细胞癌、黏液细胞癌划入低分化腺癌组），混合型22例。其中有淋巴结转移者180例，无淋巴结转移者52例。浸润深度根据美国癌症联合委员会（AJCC）第7版胃癌TNM分期标准分期，T1 2例，T2 18例，T3 38例，T4 174例。232例患者全部完成随访。中位随访时间为2年。
1.2 试剂鼠抗人RANK单克隆抗体购自美国R&D systems公司；S-P检测试剂盒及DAB显色液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。
1.3 检测方法免疫组化染色采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（S-P）法，操作方法按试剂盒说明书进行。均经DAB显色，苏木素复染。用已知阳性对照片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.4 免疫组化检测结果判定RANK均以胞膜和（或）胞质出现棕黄色颗粒为阳性染色，于400倍视野下随机选取5个不同视野，每个视野得分由阳性细胞比例和显色强度决定。阳性细胞比例：≤5%为0分、> 5%～25%为1分，> 25%～50%为2分，> 50%～75%为3分，> 75%为4分；显色强度：未着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。2项分数乘积为该视野得分，5个视野分数的平均值为最后得分。最后按得分划分等级：0～1分（-），2～4分（+），5～7分（++），≥8分（+++）。（-）和（+）为阴性，（++）和（+++）为阳性。
1.5 统计学分析应用SPSS 18.0软件进行统计分析，RANK的表达与临床病理因素之间的关系采用Spearman等级相关性分析；RANK的表达与生存时间的关系采用Kaplan-Meier生存曲线及log-rank检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 RANK在胃癌组织中的表达RANK的阳性染色位于细胞质和（或）胞膜，为均匀一致的棕黄色颗粒。在232例胃癌标本中有123例RANK高表达，阳性率为53%；亚组分析中，胃癌肠型患者91例标本中有64例RANK高表达，阳性率为70.3%。见图 1。
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| A, positive; B, negative. 图 1 RANK在胃癌组织中的表达×100 Fig.1 RANK expression in gastric carcinoma original magnification ×100 |
2.2 RANK的表达与胃癌临床病理特征的关系
RANK的表达与性别、年龄、分化程度、浸润深度、临床分期以及淋巴结转移等病理因素无显著相关性（P > 0.05），Lauren分型相关（P = 0.000 1），见表 1。
| Clinicopathological characteristics | n | RANK expression | ||
| Positive [n（%）] | Negative [n（%）] | P | ||
| Total | 232 | 123（53.0） | 109（47.0） | |
| Sex | 0.246 | |||
| Male | 166 | 92（55.4） | 74（44.6） | |
| Female | 66 | 31（47.0） | 35（53.0） | |
| Age（year） | 0.482 | |||
| ≤60 | 107 | 50（46.7） | 57（53.3） | |
| > 60 | 125 | 73（58.4） | 52（41.6） | |
| Lauren grade | 0.001 | |||
| Intestinal | 91 | 64（70.3） | 27（29.7） | |
| Diffuse | 119 | 45（37.8） | 74（62.2） | |
| Mixed | 22 | 14（63.6） | 8（36.4） | |
| Depth of invasion | 0.778 | |||
| T1+T2 | 20 | 10（50.0） | 10（50.0） | |
| T3+T4 | 212 | 113（53.3） | 99（46.7） | |
| LN metastasis | 0.782 | |||
| N0 | 52 | 27（51.9） | 25（48.1） | |
| N1+N2 | 84 | 47（56.0） | 37（44.0） | |
| N3 | 96 | 49（51.0） | 47（49.0） | |
| LN metastasis grade | 0.482 | |||
| ≤0.25 | 146 | 80（54.8） | 66（45.2） | |
| > 0.25 | 86 | 43（50.0） | 43（50.0） | |
| TNM staging | 0.778 | |||
| Ⅰ+Ⅱ | 56 | 31（55.4） | 25（44.6） | |
| Ⅲ+Ⅳ | 176 | 92（52.3） | 84（47.7） | |
在亚组分析中，胃癌肠型91例中，RANK的表达与性别、年龄、浸润深度、临床分期以及淋巴结转移等病理因素无显著相关性（P > 0.05），与淋巴结转移度相关（P = 0.032），见表 2。
| Clinicopathological characteristics | n | RANK expression | ||
| Positive [n（%）] | Negative [n（%）] | P | ||
| Total | 91 | 64（70.3） | 27（29.7） | |
| Sex | 0.847 | |||
| Male | 73 | 51（69.9） | 22（30.1） | |
| Female | 18 | 13（72.2） | 5（27.8） | |
| Age（year） | 0.032 | |||
| ≤60 | 39 | 23（59.0） | 16（41.0） | |
| > 60 | 52 | 41（78.8） | 11（21.2） | |
| Depth of invasion | 0.631 | |||
| T1+T2 | 5 | 4（80.0） | 1（20.0） | |
| T3+T4 | 86 | 60（69.8） | 26（30.2） | |
| LN metastasis | 0.161 | |||
| N0 | 19 | 11（57.9） | 8（42.1） | |
| N1+N2 | 41 | 29（70.7） | 12（29.3） | |
| N3 | 31 | 24（77.4） | 7（22.6） | |
| LN metastasis grade | 0.032 | |||
| ≤0.25 | 63 | 40（63.5） | 23（36.5） | |
| > 0.25 | 28 | 24（85.7） | 4（14.3） | |
| TNM staging | 0.631 | |||
| Ⅰ+Ⅱ | 23 | 14（60.9） | 9（39.1） | |
| Ⅲ+Ⅳ | 68 | 50（73.5） | 18（26.5） | |
2.3 RANK的表达与胃癌患者生存期的关系
RANK阳性组患者生存率为52.8%，阴性组患者生存率为58.7%，差异无统计学意义（P = 0.306），见图 2。亚组分析中，肠型胃癌RANK阳性组患者生存率高于阴性组，分别为46.9%和74.1%，两者有统计学意义（P = 0.016），见图 3。弥漫型胃癌RANK阳性组与阴性组生存率无统计学差异（P = 0.664），见图 4。
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| 图 2 胃癌组织中RANK的表达与患者生存期之间的关系 Fig.2 The relationship of the RANK expression in gastric cancer with overall survival |
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| 图 3 肠型胃癌组织中RANK的表达与患者生存期之间的关系 Fig.3 The relationship of the RANK expression in intestinal-type gastric cancer with overall survival |
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| 图 4 弥漫型胃癌组织中RANK的表达与患者生存之间的关系 Fig.4 The relationship of the RANK expression in diffuse-type gastric cancer with overall survival |
3 讨论
胃癌中肿瘤的侵袭转移是一个涉及多因素的复杂过程，多种基因在此过程中起重要作用。
RANK是TNFRS的成员。RANK最初被发现在溶骨过程以及淋巴结发育中有重要作用[10]。既往研究表明，RANK在肿瘤组织中高表达，如骨肉瘤[11-12]、软骨肉瘤[13]、乳腺癌[14]、前列腺癌[15-16]、肾癌[17]、口腔鳞癌[18]、肺癌[8]、甲状腺癌[19]以及黑色素瘤[20]等。本研究结果显示，胃癌中RANK高表达，在细胞膜、细胞质均有表达，阳性率为53%，肠型胃癌中阳性率为71.7%。
RANK与Lauren分型相关（P = 0.001），提示RANK在肠型及弥漫型胃癌中存在差异性表达。国内外无类似报道。相关研究提示，肠型胃癌起源于胃黏膜的肠上皮化生，弥漫型胃癌起源于胃固有黏膜，与肠化生无关。RANK是否能影响肿瘤细胞发生过程中进一步向肠型分化，需要进一步研究验证。
RANK/RANKL/OPG是近年来研究较多的信号通路，RANKL和RANK结合后，可诱导RANK阳性的胃癌细胞侵袭转移，在乳腺癌，前列腺癌中也有类似报道[21-23]。考虑RANK可能是肿瘤细胞侵袭转移通路的重要受体。此外，在乳腺癌和前列腺癌和肺癌的研究[24]中，研究者提示RANK/RANKL/OPG系统有可引起肿瘤细胞定向骨转移，在胃癌中相关研究较少，有文献[25]报道，胃癌骨转移不依靠RANK/RANKL/OPG通路。本研究结果显示，RANK通路在肠型胃癌高表达与淋巴结转移度相关（P = 0.032）。由此推测，RANK在肠型胃癌中对肿瘤细胞的迁移可能与局部侵袭及淋巴结转移相关。JONES等[6]在乳腺癌患者转移淋巴结中发现RANK表达。DANIELE等[26]在对93例浸润性导管癌及小叶乳腺癌研究发现，RANK与淋巴结转移相关（P < 0.05）。在既往胃癌中研究[27]中存在类似报道，提示RANK通路在胃癌肿瘤的发生及诱导淋巴结和脏器转移中起一定作用。
RANK高表达对患者生存的影响既往研究例数较少，DANIELE等[26]对93例浸润性导管癌及小叶乳腺癌的研究发现，RANK阳性的患者存在生存劣势，且有统计学意义（P = 0.034）。本研究中，RANK在弥漫型胃癌中与总生存无关，而在肠型胃癌中RANK阳性的患者存在生存劣势（P = 0.016）。考虑肠型胃癌中对生存的影响可能与RANK阳性引起肿瘤细胞局部及淋巴结侵袭转移相关。
综上所述，RANK在胃癌中与Lauren分型相关，且在亚组分析中，肠型胃癌患者的RANK表达与淋巴结转移及生存预后相关。RANK可能是一个胃癌发生发展相关的有价值的分子标记物，可以成为肠型胃癌诊断和治疗的一个新的作用靶点，其具体机制需要进一步研究证实。
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