抗生素作为生长促进剂在畜牧生产中应用已有数十年历史[1]。饲料中添加抗生素，一方面提高了动物的健康水平、生长性能和饲料利用率；另一方面也造成了抗生素残留、环境污染、细菌耐药性和食品安全等问题。鉴于抗生素作为生长促进剂使用产生的诸多问题，欧盟自2006年已禁止抗生素作为生长促进剂在饲料中使用[2]。其后，日本、韩国等也相继出台相关规定。中国也颁布公告从2020年7月1日起禁止在动物饲料中使用抗生素作为生长促进剂。因此，寻找抗生素替代品已成为许多研究者的热门课题。抗生素替代种类很多，包括益生菌、益生元、有机酸、植物提取物、无机抗菌剂、抗菌肽等。其中，益生元是一种不可被动物消化的饲料成分，但可以被肠道内部细菌发酵利用，促进该部分细菌的生长繁殖，有益于宿主健康。益生元种类很多，包括聚糖类、多糖类、植物提取物、蛋白水解物、多元醇等[3]。目前，研究比较多的有低聚木糖、果聚糖、半乳聚糖、壳聚糖等。低聚壳聚糖(chito-oligosaccharide, COS)是一种由甲壳素(chitin)或壳聚糖(chitosan) 经化学或者酶解获得的阳离子碱性氨基多糖[4]，通常由N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)或氨基葡萄糖(GlcN)单元通过β-1, 4-O-糖苷键连接组成[5]。COS不仅具有抗菌[6]、抗炎[7]、抗氧化[8]、免疫增强[9]等多种生物学功能，且兼具无毒、无残留、易被生物降解的特点[10]，因此，COS在医疗、食品、化妆品、农业生产和畜牧业中均被广泛应用[11-12]。前人研究表明，日粮中添加COS能够显著提高肉鸡的平均日采食量、平均日增重和营养物质的消化率[13]，提升肉品质[14]，改善肠道形态功能、肠道屏障功能、肠道抗氧化能力和肠道免疫力[15]。此外，日粮中添加COS能够显著提高断奶仔猪的生长性能和饲料消化率[16-17]，改善肠道屏障功能和肠道炎症反应[18]。Xie等[19]报道，在母猪日粮中添加30 mg·kg-1的COS显著提高了哺乳仔猪的肠道抗氧化能力，并促进了小肠的发育。饲料中添加200 mg·kg-1COS可提高虹鳟的生长性能和非特异性免疫功能[20]。宋涛[21]研究指出，日粮中添加壳寡糖能够增强水在肌肉中的存留能力，从而降低北京鸭肌肉的滴水损失。Chang等[22]研究表明，日粮中添加200 mg·kg-1 COS能够降低肌糖原糖酵解代谢与乳酸积累，从而提高黄羽肉鸡胸肌肉品质。此外，范秋丽等[23]也发现，日粮中添加COS可改善1~66日龄黄羽肉鸡肉色、提高肉品质。本课题组前期体外研究表明，COS能有效抑制3种常见鸭源性致病菌[24]。然而，COS在肉鸭养殖上的应用却鲜有报道。本试验旨在研究COS替代抗生素对樱桃谷肉鸭生长性能、血清生化指标、屠宰性能、肠道屏障功能与肌肉品质的影响，为其在动物生产上的应用提供丰富的依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料本试验所用COS的纯度≥90%，脱乙酰度≥85%，平均相对分子质量25 000 u。
1.2 试验动物与试验设计选取1日龄平均体质量(56.2±0.1) g的樱桃谷肉鸭540只，随机分为3组，每组6个重复，每个重复30只，分别饲喂基础日粮(对照组，control group)、基础日粮+40 mg·kg-1杆菌肽锌(抗生素组，antibiotic group)和基础日粮+50 mg·kg-1 COS(COS组，COS group)的试验日粮。基础日粮参照肉鸭饲养标准(NY/T 2122—2012)配制并作修改，基础日粮组成及营养水平见表 1。
|
表 1 基础日粮组成及其营养水平(风干基础) Table 1 Ingredients and nutrient levels of the basic diets (air-dry basis) |
整个试验为期42 d，其中1~14 d为试验前期，15~42 d为试验后期。试验期间樱桃谷肉鸭实行网上平养，饲喂颗粒饲料，自由采食和饮水，24 h连续光照，按常规程序进行免疫和消毒。
1.4 测定指标及方法1.4.1 生产性能 在试验开始时，称量试验鸭初始体质量。每3 d记录一次耗料量，在试验42 d结束时，全部试验鸭禁食12 h，然后进行称重，所得数据用于平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)以及料重比(F/G)的计算。
1.4.2 屠宰性能 在试验结束时各组称重后，从每重复中随机选取一只与该重复平均体重相近的公鸭(共18只)用作屠宰测定。记录每只鸭的活重、屠宰体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、腿肌重以及腹脂重。屠宰性能参照《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》(NY/T 823—2004)进行。
1.4.3 免疫器官指数 试验鸭屠宰后，分离脾、胸腺和法氏囊，用滤纸吸取多余水分和血液，剔除脂肪，称重，计算免疫器官指数。计算公式：器官指数(g·kg-1)=器官重量(g)/活重(kg)。
1.4.4 血清常规生化指标 屠宰时，颈静脉采血，静置后以3 000 r·min-1离心15 min制备血清，血清于-20 ℃保存待用。血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(Glu)采用相应试剂盒测定。血清球蛋白(GLB)含量通过血清总蛋白与血清白蛋白含量的差值算出，白球比(A/G)是白蛋白与球蛋白的含量比值。本试验所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所，具体操作步骤按说明书要求进行。
1.4.5 小肠肠道通透性指标 血清二胺氧化酶(diamine oxidase, DAO)、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)以及D-乳酸的含量用特异性酶联免疫测试盒进行测定，所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，具体操作过程按说明书要求进行。
1.4.6 小肠肠道黏膜紧密连接蛋白基因表达 用洁净的载玻片刮取十二指肠、空肠和回肠的肠黏膜，放入冻存管中，然后立即投入液氮中保存待测。取十二指肠、空肠和回肠的黏膜样品约100 mg，提取总RNA，具体操作依据RNAiso试剂盒(TaKaRa公司)说明书，用NanoDrop ND-1000 UV紫外分光光度计(Nano Drop Technologies, Wilmington, DE, USA)检测RNA含量和纯度。反转录采用TaKaRa公司的PrimeScriptTM RT Master Mix kit反转录试剂盒, 具体操作步骤按说明书要求进行，所得cDNA于-20 ℃保存。荧光定量PCR所用的引物序列: 闭锁小环蛋白(zonula occludens-1, ZO-1)、闭合蛋白-1(claudin-1, CLDN-1)、咬合蛋白(occluding, OCLN)和β-肌动蛋白(β-actin)基因的引物序列如表 2所示[25]。按照荧光定量试剂盒(TaKaRa公司，TB Green Premix Ex TaqTM kit, 20 μL反应体系)说明书进行加样。扩增条件为：95 ℃预变性5 min; 循环反应95 ℃ 10 s, 60 ℃ 34 s, 40循环；熔解曲线95 ℃ 15 s, 60 ℃ 60 s, 95 ℃ 15 s。每个样品3个重复，β-actin为内参基因，目的基因相对表达量通过2-ΔΔCT进行分析[26]。
|
|
表 2 荧光定量PCR引物序列 Table 2 Sequences for real-time PCR primers |
1.4.7 小肠肠道黏膜免疫指标 称取十二指肠、空肠和回肠肠黏膜样品各0.2 g，按照组织质量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下进行匀浆。然后4 450×g，4 ℃条件下离心15 min，取上清-20 ℃保存待测。小肠黏膜免疫球蛋M(immunoglobulin M, IgM)、免疫球蛋G(immunoglobulin G, IgG)和分泌性免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A, sIgA)采用鸭特异性酶联免疫试剂盒进行测定，所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，具体操作步骤按照说明书要求进行。
1.4.8 肌肉抗氧化能力 每个样本称取0.2 g肌肉组织(避开脂肪和结缔组织)，按照组织质量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加入9倍体积的生理盐水，剪碎，冰水浴条件下匀浆，然后3 000 r·min-1离心10 min，取上清液用于相关指标测定。肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量均使用南京建成生物工程研究所测定试剂盒进行测定，操作流程按试剂盒说明书进行。肌肉组织蛋白含量用二喹啉甲酸(BCA)法进行测定。
1.4.9 肌肉品质 采集鸭的左侧胸肌、腿肌用于pH和肌肉色泽的测定，右侧胸肌、腿肌用于滴水损失及蒸煮损失的测定。
肌肉pH：用HI9025pH仪(HANNA instruments，Italy)测定在4 ℃冰箱保存24 h的左侧胸肌、腿肌的pH。测定时将pH仪电极完全插入肉样中，示数不变时读数，每个样本在不同部位测定3次，取平均值。
肌肉色泽: 宰后24 h，用色差仪(Konica Minolta Sensing, Japan)测定左侧胸肌和腿肌的亮度值(L*)、红度值(a*)与黄度值(b*)，在每个样品的上、中、下部位测定肉色，最后求平均值。
滴水损失: 从右侧胸肌、腿肌顺着肌纤维方向切下10 g左右的长方体状的肉块，剔除脂肪和结缔组织，称重记为W1，然后放入塑料袋中并沿肌纤维方向倒挂在4 ℃冰箱中，24 h后取出，用吸水纸吸去表面汁液，称重记为W2。24 h滴水损失=[(W1-W2)/W1]×100%。
蒸煮损失: 从右侧胸肌、腿肌切下10 g左右的肉块，称重记为M1，然后放进自封袋内，排净自封袋内空气，使肉样贴紧自封袋。再将装肉样的自封袋置于80 ℃的水浴锅中，当肉样的中心温度达到75 ℃时，立即取出肌肉，用吸水纸吸干肉样表面水分，称重记为M2。24 h蒸煮损失=[(M1-M2)/M1]×100%。
1.5 数据处理数据经Excel 2019进行初步处理后，用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，不同组间用Duncan’s法进行多重比较，结果均以“平均数±标准误(x±SE)”表示，显著水平为P＜0.05。
2 结果 2.1 COS对樱桃谷肉鸭生长性能的影响由表 3可知，与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS能显著提高樱桃谷肉鸭的平均日增重和平均日采食量(P＜0.05)，但对饲料转化率无显著影响(P>0.05)。
|
|
表 3 COS对樱桃谷肉鸭生长性能的影响 Table 3 Effects of COS on the growth performance of Cherry Valley ducks |
由表 4可知，与对照组相比，日粮中添加COS或抗生素对肉鸭屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、瘦肉率和腹脂率指标无显著性影响(P>0.05)。
|
|
表 4 COS对樱桃谷肉鸭屠宰性能的影响 Table 4 Effects of COS on the slaughter performance of Cherry Valley ducks |
由表 5可知，COS组的脾脏指数和胸腺指数显著高于对照组和抗生素(P＜0.05)，但组间法氏囊指数无显著差异(P>0.05)。
|
|
表 5 COS对樱桃谷肉鸭免疫器官指数的影响 Table 5 The effect of COS on immune organ indexes of Cherry Valley ducks |
由表 6可知，COS组和抗生素组的血清GLB含量显著高于对照组(P＜0.05)，而血清BUN含量和A/G显著低于对照组(P＜0.05)。血清TP、Glu、ALB和TG含量各组间无显著差异(P>0.05)。
|
|
表 6 COS对樱桃谷肉鸭血清生化指标的影响 Table 6 Effects of COS on serum biochemical indices of Cherry Valley ducks |
由表 7可知，与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS显著降低了血清DAO和LPS含量(P＜0.05)。此外，与对照组相比，日粮中添加COS显著降低了血清D-乳酸含量(P＜0.05)。
|
|
表 7 COS对樱桃谷肉鸭肠道通透性指标的影响 Table 7 Effects of COS on intestinal permeability indexes of Cherry Valley ducks |
由表 8可知，与对照组相比，日粮中添加COS显著提高了十二指肠中OCLN的表达量(P＜0.05)。此外，与对照组相比，抗生素组的空肠OCLN表达量显著高于对照组(P＜0.05)。
|
|
表 8 COS对樱桃谷肉鸭肠道黏膜紧密连接蛋白基因相对表达的影响 Table 8 The effect of COS on the related genes expressions of tight junction protein in intestinal mucosa of Cherry Valley ducks |
由表 9可知，与对照相比，日粮中添加COS或抗生素能够显著提高十二指肠黏膜sIgA和IgG水平(P＜0.05)。与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS能够显著提高空肠和回肠黏膜的IgM含量(P＜0.05)。
|
|
表 9 COS对樱桃谷肉鸭肠道黏膜免疫指标的影响 Table 9 Effects of COS on intestinal mucosa immune indices of Cherry Valley ducks |
由表 10可知，COS组的腿肌的a*显著高于对照组(P＜0.05)，COS和抗生素组的腿肌的滴水损失显著低于对照组(P＜0.05)。各组间的胸肌各肉品质指标，腿肌pH、L*、b*和蒸煮损失无显著差异(P>0.05)。
|
|
表 10 COS对樱桃谷肉鸭胸肌和腿肌肌肉品质的影响 Table 10 Effects of COS on the meat quality of Cherry Valley ducks breast muscle and leg muscle |
由表 11可知，COS组和抗生素组的腿肌SOD活性、T-AOC水平显著高于对照组(P＜0.05)，腿肌MDA含量显著低于对照组(P＜0.05)。各组间的胸肌抗氧化水平无显著差异(P>0.05)。
|
|
表 11 COS对樱桃谷肉鸭肌肉抗氧化能力的影响 Table 11 Effects of COS on the antioxidant ability of muscle of Cherry Valley ducks |
到目前为止，COS对樱桃谷肉鸭生长性能影响的研究鲜有报道。本研究表明，与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS显著提高了肉鸭的平均日增重和平均日采食量。Zhou等[14]研究发现，日粮中添加COS和卑霉素显著提高了肉仔鸡的体增重和采食量，二者提高效果相似。Liu等[27]研究表明，日粮中添加COS能够显著提高断奶仔猪的平均日增重、平均日采食量以及饲料利用率，其结果与添加金霉素相似。Khambualai等[28]研究指出，日粮中添加壳聚糖可以显著提高肉仔鸡的体增重和采食量。Thongsong等[29]研究显示，日粮中添加COS能显著提高断奶仔猪的体增重、平均日采食量以及营养物质的回肠消化率。以上结果说明，日粮中添加COS可替代抗生素提高畜禽动物的生长性能。COS对樱桃谷肉鸭生产性能提高的机制可能是通过提高动物的采食量和消化率[14, 30]，血浆GH和IGF-I浓度[31]，免疫力[32]以及改善肠道健康[33]来实现的。
此外，本次试验中添加40 mg·kg-1的杆菌肽锌未对樱桃谷肉鸭的生长产生显著的促进作用，其原因可能是由于饲养环境较好。本试验采取网上平养的饲养方式，饲养密度低，饲养场地洁净，空气质量好，因此，添加杆菌肽锌未产生出促生长效果。史彬林等[34]也研究发现，在养殖条件较为洁净的情况下，日粮中添加50 mg·kg-1的金霉素未对肉鸡的生长产生明显的促进作用，本试验结果与前人结果相似。
3.2 COS对樱桃谷肉鸭屠宰性能的影响屠宰性能是衡量动物产肉能力的重要指标，具有巨大的经济价值。辛清武等[35]研究指出，日粮中添加40 mg·kg-1的COS对北京鸭屠宰性能的各项指标无显著影响。在本研究中，各试验组的屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、瘦肉率以及腹脂率差异不显著，表明日粮中添加COS对肉鸭的屠宰性能的影响效果不显著。有研究指出，日粮中添加壳聚糖对贵妃鸡和黄羽肉鸡的屠宰性能无显著影响[36-37]。Arslan和Tufan[38]研究也发现，日粮中添加COS对肉仔鸡的屠宰性能无显著影响。本试验结果与上述的研究结果基本一致。
3.3 COS对樱桃谷肉鸭免疫器官指数的影响免疫器官指数是衡量禽类免疫功能简单、直接、有效的重要指标[39]。胸腺是T细胞分化和成熟的主要场所[40]。脾是一个关键的外周淋巴器官，在产生免疫反应中起主导作用[41]。Deng等[42]研究发现，与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS能够显著提高肉仔鸡的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数。Miao等[43]研究表明，日粮中添加壳聚糖显著提高了豁眼鹅的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数。在本试验中，与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS提高了胸腺指数和脾脏指数，结果与Deng等[42]和Miao等[43]研究结果相似，本试验结果说明，COS对肉鸭的免疫器官发育具有促进作用，能够增强肉鸭的免疫功能。
3.4 COS对樱桃谷肉鸭血清生化指标的影响血清生化指标是反映动物机体物质代谢和健康状况的重要指标。血清TP是所有蛋白质合起来的总称，主要包括ALB和GLB[44]。GLB主要由免疫球蛋白构成，对于机体免疫具有重要意义。此外，A/G也是动物机体免疫能力大小的衡量指标，在一定范围内，A/G越小，表明机体的免疫力越好。辛清武等[45]研究发现，日粮中添加COS能极显著提高北京鸭母鸭血清中GLB的含量，并显著降低母鸭血清中的A/G。本研究发现，日粮中添加COS和抗生素不仅能够显著提高血清中GLB含量，而且显著降低A/G水平，表明可在一定程度上提高肉鸭的免疫力，这一结果与辛清武等[45]研究结论相似。COS提高肉鸭的免疫力，有利于其免疫系统清除体内的有毒有害物质，减少这些物质在肉鸭体内的积累，在一定程度上有利于提高肉鸭的肌肉品质。
血清BUN为蛋白质代谢后产物，是反映动物体内蛋白质代谢和日粮氨基酸平衡状况的指标。血清BUN含量与日粮中含氮物质总量、蛋白质的利用率等有关，日粮中含氮物质增多或蛋白质利用率降低时均可导致BUN含量升高[46-47]。Tang等[31]研究表明，日粮中添加的壳聚糖能够显著降低断奶仔猪血清中BUN含量，增强断奶仔猪的蛋白质合成代谢，其效果与添加抗生素类似。本研究表明，日粮中添加COS能够显著降低血清中的BUN含量，其降低效果与抗生素类似。说明COS与抗生素具有类似的增强肉鸭蛋白合成代谢的效果。此外，各组间的血清Glu、TP、ALB和TG含量无显著差异。
3.5 COS对樱桃谷肉鸭肠道屏障功能的影响3.5.1 COS对樱桃谷肉鸭肠道黏膜通透性指标的影响 肠道屏障功能完整对于阻止有害菌在肠道的定植，有毒或者过敏性物质从肠道进入动物体内至关重要。D-乳酸是肠道细菌的代谢产物，LPS主要来自于肠道细菌，DAO则主要存在于肠黏膜和纤毛上皮细胞中。肠道屏障功能完整时，D-乳酸和LPS难以进入血液循环，但当肠道屏障功能受损，肠道通透性增加，D-乳酸和LPS就会透过受损的肠黏膜进入血液循环，使其在血液中的水平升高。肠黏膜受损也会导致DAO释放进入血液循环，导致血液中DAO含量增加。因此，测定血清中D-乳酸、LPS和DAO的水平可反映肠道屏障的通透性和受损情况。本试验结果表明，与对照组相比，日粮中添加COS能够显著降低血清中D-乳酸水平，与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS能够显著降低血清DAO和LPS水平，说明日粮中添加COS有助于提高肠道的屏障功能，其提高效果优于抗生素。Li等[15]研究表明，日粮中添加30 mg·kg-1 COS能够显著降低肉鸡血清DAO和LPS水平，其效果与50 mg·kg-1金霉素相似。Lan等[48]研究发现，日粮中添加COS能显著降低黄羽肉鸡血清DAO和D-乳酸含量。肖定福等[49]研究认为，日粮中添加壳聚糖能降低断奶仔猪血浆中D-乳酸、DAO和血清内皮素-1水平。本研究结果与前人相似，说明日粮中添加COS能够增强肉鸭的肠道屏障功能。
3.5.2 COS对樱桃谷肉鸭肠道黏膜紧密连接蛋白基因表达量的影响 紧密连接蛋白包括CLDN-1、OCLN和ZO-1等，是肠道黏膜屏障的重要组成部分。肠道黏膜屏障的完整是肠道正常吸收营养物质和肠道健康的基础。CLDN-1、OCLN和ZO-1的基因表达量能够反映肠道屏障的状态。Osho和Adeola[50]研究表明，日粮中添加COS能够提高肉鸡空肠中CLDN、OCLN和ZO-1的表达量。本试验结果表明，与对照组相比，COS组的十二指肠OCLN表达量显著升高，抗生素组的空肠OCLN表达量显著增加，本试验结果与Osho和Adeola[50]研究部分相似。有研究指出，带正电荷的COS通过与细菌内核酸的结合，从而抑制有害微生物的繁殖，营造了良好的肠道微生物环境，进而增强紧密连接蛋白的表达[27, 51]。然而，Xiong等[52]研究指出，仔猪日粮中添加30 mg·kg-1COS降低了ZO-1在空肠和回肠，OCLN在回肠的表达量。不同研究结果的差异可能是COS添加剂量、动物品种以及试验环境等的不同所致，COS对于肠道紧密连接蛋白表达的影响机制需要进一步研究。
3.5.3 COS对樱桃谷肉鸭肠道黏膜免疫指标的影响 肠黏膜sIgA是保护肠道免受肠道毒素和微生物病原体侵害的第一道防线，可以促进抗原和病原微生物从胃肠道中清除[53-54]。此外，肠黏膜细胞分泌的IgM和IgG也在肠道免疫屏障中发挥重要作用。Wan等[55]研究发现，日粮中添加COS可提高断奶仔猪血清IgG和肠道黏膜IgG、IgM和sIgA水平，表明COS可促进仔猪免疫球蛋白的分泌。冷智贤等[56]研究表明，日粮中添加30 mg·kg-1COS可以提高肉鸡空肠黏膜IgG含量。另外，也有研究表明，日粮中添加壳寡糖能够显著提高肉鸡和豁眼鹅血清中IgG、IgM和IgA水平[43, 57]。本试验结果表明，与对照相比，日粮中添加COS能够显著提高十二指肠黏膜sIgA和IgG水平，其效果与抗生素相似；与对照组和抗生素组相比，日粮中添加COS能够显著提高空肠和回肠黏膜的IgM含量。COS增强肠道黏膜免疫功能的机制可能是通过直接刺激宿主的免疫应答或作为抗原与病原体的黏附来刺激宿主的免疫系统，从而增强宿主的免疫应答[32]。综合前人试验结果和本试验结果，说明日粮中添加COS能够提高肉鸭肠道黏膜免疫球蛋白的含量，且效果优于抗生素。
3.6 COS对樱桃谷肉鸭肌肉品质和抗氧化能力的影响肌肉的pH、系水力、肉色、嫩度都是常用来评价肉品质的指标。pH反映了宰后机体内糖原酵解的速度，与肌肉颜色、嫩度等密切相关。蒸煮损失和滴水损失是反映系水力的指标，有着非常重要的经济价值。肉色作为重要的感官指标，主要受肌红蛋白和血红蛋白含量及其存在状态决定。日粮中添加壳寡糖显著提高了肉鸡胸肌和腿肌a*值，同时显著降低肉鸡腿肌b*值，但对胸肌和腿肌pH和L*值无显著影响[58]。白洁等[59]研究表明，与空白对照组相比，饲粮添加100 mg·kg-1壳寡糖显著提高肉鸡胸肌和腿肌的a*值，腿肌的L*值有升高的趋势，腿肌的滴水损失有降低的趋势。Miao等[60]研究发现，日粮中添加200 mg·kg-1的壳聚糖显著降低了豁眼鹅胸肌和腿肌的b*值和滴水损失，提高了腿肌的a*值，但对胸肌的a*值无显著影响。本研究表明，与对照组相比，日粮中添加COS和抗生素均能提高腿肌的肌肉a*值，但COS组的效果差异显著，抗生素组差异不显著。说明COS对肌肉a*值的提高效果优于抗生素。本研究还发现，日粮中添加COS或抗生素均能显著降低腿肌肌肉的滴水损失，且二者的降低效果相似，说明COS具有和抗生素类似的降低滴水损失的能力。但不同组别的胸肌肌肉品质指标差异均不显著。有研究指出，COS对肉品质的改善可归结于其能降低肌肉中的肌糖原糖酵解代谢水平和乳酸的积累，从而提高肌肉pH，改善肉品质[22]。此外，也有研究表明，带正电荷的壳聚糖被吸收后能够增强肌肉中蛋白质与电荷间的相互作用力，进而增强了肌肉对水的存留能力，进而改善肉品质[38, 61]。本试验所用COS与壳聚糖分子结构相似，但分子量更小，容易于吸收，更有利于改善肉品质。影响肉品质的因素较多，且不同因素间的关系较为复杂，COS对肉品质的确切影响机理还不明确，有待进一步的探索。本试验结果与前人的发现有相同之处，也有不同之处，造成结果差异的原因可能是试验用的材料以及试验环境等因素的不同所致。
T-AOC是衡量动物机体抗氧化能力的重要指标，SOD是动物机体重要的抗氧化酶之一，MDA是衡量氧化应激程度的标志物。有研究表明，肉品质下降是肌肉的抗氧化能力降低导致的，肌肉中MDA含量越高，SOD活性和T-AOC越低，肉品质越差[62-63]。Liaqat和Eltem[5]报道，COS分子内的氨基基团可以与自由基反应生成稳定的自由基，阻断自由基的反应链，从而抑制氧化应激的发生。Qu和Han[64]研究表明, COS可能具有恢复小鼠由高脂饮食影响的SOD的活性。李阳等[58]研究指出，日粮中添加壳寡糖显著提高肉鸡血浆、胸肌和腿肌的T-AOC和SOD活性，并降低了血浆、腿肌和胸肌中的MDA含量。Wan等[55]研究表明，日粮中添加COS可显著提高断奶仔猪血清中SOD和T-AOC活性，并降低血清MDA含量。丁雪梅等[65]研究指出，日粮中添加壳寡糖能显著提高肉鸡血清T-SOD和T-AOC活性，并降低MDA含量。本研究表明，日粮中添加COS或抗生素显著提高了腿肌的SOD活性和T-AOC水平，显著降低了腿肌MDA含量，改善了腿肌的肌肉品质，并且COS与抗生素具有相似效果。
4 结论日粮中添加50 mg·kg-1 COS能够提高樱桃谷肉鸭的生长性能，促进免疫器官发育，增强小肠黏膜屏障功能，改善肉品质，可替代日粮40 mg·kg-1杆菌肽锌用于肉鸭养殖。
| [1] | MOORE P R, EVENSON A, LUCKEY T D, et al. Use of sulfasuxidine, streptothricin, and streptomycin in nutritional studies with the chick[J]. J Biol Chem, 1946, 165(2): 437–441. DOI: 10.1016/S0021-9258(17)41154-9 |
| [2] | COMMUNITY E. Regulation (EC) No.1831/2003 of the European Parliament and of the Council of 22 September 2003 on additives for use in animal nutrition[J]. Off J Eur Union, 2003, L268: 29–43. |
| [3] | CHENG G Y, HAO H H, XIE S Y, et al. Antibiotic alternatives: the substitution of antibiotics in animal husbandry?[J]. Front Microbiol, 2014, 5: 217. |
| [4] | XIA W S, LIU P, HANG J L, et al. Biological activities of chitosan and chitooligosaccharides[J]. Food Hydrocoll, 2011, 25(2): 170–179. DOI: 10.1016/j.foodhyd.2010.03.003 |
| [5] | LIAQAT F, ELTEM R. Chitooligosaccharides and their biological activities: a comprehensive review[J]. Carbohydr Polym, 2018, 184: 243–259. DOI: 10.1016/j.carbpol.2017.12.067 |
| [6] | BENHABILES M S, SALAH R, LOUNICI H, et al. Antibacterial activity of chitin, chitosan and its oligomers prepared from shrimp shell waste[J]. Food Hydrocoll, 2012, 29(1): 48–56. DOI: 10.1016/j.foodhyd.2012.02.013 |
| [7] | NAVEED M, PHIL L, SOHAIL M, et al. Chitosan oligosaccharide (COS): an overview[J]. Int J Biol Macromol, 2019, 129: 827–843. DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2019.01.192 |
| [8] | MENGÍBAR M, MATEOS-APARICIO I, MIRALLES B, et al. Influence of the physico-chemical characteristics of chito-oligosaccharides (COS) on antioxidant activity[J]. Carbohydr Polym, 2013, 97(2): 776–782. DOI: 10.1016/j.carbpol.2013.05.035 |
| [9] | ZOU P, YANG X, WANG J, et al. Advances in characterisation and biological activities of chitosan and chitosan oligosaccharides[J]. Food Chem, 2016, 190: 1174–1181. DOI: 10.1016/j.foodchem.2015.06.076 |
| [10] | PHIL L, NAVEED M, MOHAMMAD I S, et al. Chitooligosaccharide: an evaluation of physicochemical and biological properties with the proposition for determination of thermal degradation products[J]. Biomed Pharmacother, 2018, 102: 438–451. DOI: 10.1016/j.biopha.2018.03.108 |
| [11] | HAMED I, ÖZOGUL F, REGENSTEIN J M. Industrial applications of crustacean by-products (chitin, chitosan, and chitooligosaccharides): a review[J]. Trends Food Sci Technol, 2016, 48: 40–50. DOI: 10.1016/j.tifs.2015.11.007 |
| [12] | YUAN X B, ZHENG J P, JIAO S M, et al. A review on the preparation of chitosan oligosaccharides and application to human health, animal husbandry and agricultural production[J]. Carbohydr Polym, 2019, 220: 60–70. DOI: 10.1016/j.carbpol.2019.05.050 |
| [13] | LI X J, PIAO X S, KIM S W, et al. Effects of chito-oligosaccharide supplementation on performance, nutrient digestibility, and serum composition in broiler chickens[J]. Poult Sci, 2007, 86(6): 1107–1114. DOI: 10.1093/ps/86.6.1107 |
| [14] | ZHOU T X, CHEN Y J, YOO J S, et al. Effects of chitooligosaccharide supplementation on performance, blood characteristics, relative organ weight, and meat quality in broiler chickens[J]. Poult Sci, 2009, 88(3): 593–600. DOI: 10.3382/ps.2008-00285 |
| [15] | LI J, CHENG Y F, CHEN Y P, et al. Dietary chitooligosaccharide inclusion as an alternative to antibiotics improves intestinal morphology, barrier function, antioxidant capacity, and immunity of broilers at early age[J]. Animals (Basel), 2019, 9(8): 493. |
| [16] | ZHOU T X, CHO J H, KIM I H. Effects of supplementation of chito-oligosaccharide on the growth performance, nutrient digestibility, blood characteristics and appearance of diarrhea in weanling pigs[J]. Livest Sci, 2012, 144(3): 263–268. DOI: 10.1016/j.livsci.2011.12.009 |
| [17] | YANG C M, FERKET P R, HONG Q H, et al. Effect of chito-oligosaccharide on growth performance, intestinal barrier function, intestinal morphology and cecal microflora in weaned pigs[J]. J Anim Sci, 2012, 90(8): 2671–2676. DOI: 10.2527/jas.2011-4699 |
| [18] | HU S L, WANG Y, WEN X L, et al. Effects of low-molecular-weight chitosan on the growth performance, intestinal morphology, barrier function, cytokine expression and antioxidant system of weaned piglets[J]. BMC Vet Res, 2018, 14(1): 215. DOI: 10.1186/s12917-018-1543-8 |
| [19] | XIE C, LONG C, WU X, et al. Effect of maternal supplementation with chitosan oligosaccharide on the antioxidant capacity of suckling piglets[J]. J Anim Sci, 2016, 94(7): 453–456. |
| [20] |
刘含亮, 孙敏敏, 王红卫, 等. 壳寡糖对虹鳟生长性能、血清生化指标及非特异性免疫功能的影响[J]. 动物营养学报, 2012, 24(3): 479–486.
LIU H L, SUN M M, WANG H W, et al. Effects of chito-oligosaccharides on growth performance, serum biochemical indices and non-specific immunity function of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2012, 24(3): 479–486. DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2012.03.014 (in Chinese) |
| [21] |
宋涛. 日粮中不同水平壳寡糖对北京鸭生长性能、脂肪沉积以及肉品质的影响[D]. 武汉: 华中农业大学, 2005.
SONG T. The effects of chitosan oligosaccharide of different levels on growth performance, lipid storage and meat quality of Peking ducks[D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University, 2005. (in Chinese) |
| [22] | CHANG Q Q, LU Y Q, LAN R X. Chitosan oligosaccharide as an effective feed additive to maintain growth performance, meat quality, muscle glycolytic metabolism, and oxidative status in yellow-feather broilers under heat stress[J]. Poult Sci, 2000, 99(10): 4824–4831. |
| [23] |
范秋丽, 蒋守群, 苟钟勇, 等. 益生菌、低聚壳聚糖、酸化剂及复合酶对1~66日龄黄羽肉鸡生长性能、免疫功能、胴体性能和肉品质的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(5): 1360–1372.
FAN Q L, JIANG S Q, GOU Z Y, et al. Effects of probiotics, oligomeric chitosan, acidulant and complex enzymes on growth performance, immune function, carcass traits and meat quality of yellow-feathered chicken aged from 1 to 66 days old[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2020, 47(5): 1360–1372. (in Chinese) |
| [24] |
王瑞秀, 陈中卫, 刘强, 等. 不同溶剂下低聚壳聚糖对3种常见鸭源性致病菌的体外抑菌效果的影响[J]. 饲料工业, 2020, 41(16): 25–30.
WANG R X, CHEN Z W, LIU Q, et al. Inhibition effect of chitoligosaccharide with different solvent on three species of duck pathogenic bacteria in vitro[J]. Feed Industry, 2020, 41(16): 25–30. (in Chinese) |
| [25] | WANG Y Y, WANG B Z, LIU Q, et al. Palygorskite supplementation improves growth performance, oxidative status, and intestinal barrier function in cherry valley ducks[J]. J Poult Sci, 2019, 56(3): 186–194. DOI: 10.2141/jpsa.0180041 |
| [26] | LIVAK K J, SCHMITTGEN T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method[J]. Methods, 2001, 25(4): 402–408. DOI: 10.1006/meth.2001.1262 |
| [27] | LIU P, PIAO X S, KIM S W, et al. Effects of chito-oligosaccharide supplementation on the growth performance, nutrient digestibility, intestinal morphology, and fecal shedding of Escherichia coli and Lactobacillus in weaning pigs[J]. J Anim Sci, 2008, 86(10): 2609–2618. DOI: 10.2527/jas.2007-0668 |
| [28] | KHAMBUALAI O, YAMAUCHI K, TANGTAWEEWIPAT S, et al. Growth performance and intestinal histology in broiler chickens fed with dietary chitosan[J]. Br Poult Sci, 2009, 50(5): 592–597. DOI: 10.1080/00071660903247182 |
| [29] | THONGSONG B, SUTHONGSA S, PICHYANG-KURA R, et al. Effects of chito-oligosaccharide supplementation with low or medium molecular weight and high degree of deacetylation on growth performance, nutrient digestibility and small intestinal morphology in weaned pigs[J]. Livest Sci, 2018, 209: 60–66. DOI: 10.1016/j.livsci.2018.01.011 |
| [30] | HUANG R L, YIN Y L, WU G Y, et al. Effect of dietary oligochitosan supplementation on ileal digestibility of nutrients and performance in broilers[J]. Poult Sci, 2005, 84(9): 1383–1388. DOI: 10.1093/ps/84.9.1383 |
| [31] | TANG Z R, YIN Y L, NYACHOTI C M, et al. Effect of dietary supplementation of chitosan and galacto-mannan-oligosaccharide on serum parameters and the insulin-like growth factor-I mRNA expression in early-weaned piglets[J]. Domest Anim Endocrinol, 2005, 28(4): 430–441. DOI: 10.1016/j.domaniend.2005.02.003 |
| [32] | HUANG R L, DENG Z Y, YANG C B, et al. Dietary oligochitosan supplementation enhances immune status of broilers[J]. J Sci Food Agric, 2007, 87(1): 153–159. DOI: 10.1002/jsfa.2694 |
| [33] |
王秀武, 林欣, 张丽, 等. 壳寡糖对肉仔鸡生产性能、小肠组织结构和肌组织矿物质元素含量的影响[J]. 中国粮油学报, 2005, 20(2): 83–88.
WANG X W, LIN X, ZHANG L, et al. Effect of oligo-chitosan on broiler performance, small intestine structure and muscle mineral element concentration[J]. Journal of the Chinese Cereals and Oils Association, 2005, 20(2): 83–88. DOI: 10.3321/j.issn:1003-0174.2005.02.022 (in Chinese) |
| [34] |
史彬林, 李德发, 朴香淑. 壳聚糖对肉仔鸡生长性能及免疫功能的影响[J]. 中国畜牧杂志, 2005, 41(1): 9–11.
SHI B L, LI D F, PIAO X S. Effect of chitosan on growth performance and immune function in broilers[J]. Chinese Journal of Animal Science, 2005, 41(1): 9–11. DOI: 10.3969/j.issn.0258-7033.2005.01.005 (in Chinese) |
| [35] |
辛清武, 李丽, 章琳俐, 等. 低聚壳聚糖对北京鸭屠宰性能、血清抗氧化性能的影响[J]. 家畜生态学报, 2019, 40(5): 29–33.
XIN Q W, LI L, ZHANG L L, et al. Effect of Chitooligosaccharide on slaughter performance and serum antioxidant indexes of Peking duck[J]. Acta Ecologae Animalis Domastici, 2019, 40(5): 29–33. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2019.05.006 (in Chinese) |
| [36] |
黄晓亮, 常斌, 杜柄旺, 等. 壳聚糖在贵妃鸡日粮中的应用效果研究[J]. 中国饲料, 2008, 363(7): 18–20.
HUANG X L, CHANG B, DU B W, et al. Study on the application effect of chitosan in the diet of Princess Chicken[J]. China Feed, 2008, 363(7): 18–20. DOI: 10.3969/j.issn.1004-3314.2008.07.007 (in Chinese) |
| [37] |
何雪萍, 陈静文, 王润莲, 等. 不同分子质量壳聚糖对黄羽肉鸡生长性能、脂质代谢、屠宰性能及肉品质的影响[J]. 动物营养学报, 2020, 32(7): 3154–3161.
HE X P, CHEN J W, WANG R L, et al. Effects of different molecular weights of chitosan on growth performance, lipid metabolism, slaughter performance and meat quality of yellow-feather broilers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2020, 32(7): 3154–3161. (in Chinese) |
| [38] | ARSLAN C, TUFAN T. Effects of chitosan oligosaccharides and L-carnitine individually or concurrent supplementation for diets on growth performance, carcass traits and serum composition of broiler chickens[J]. Rev Med Vet, 2018, 169(4-6): 130–137. |
| [39] |
王坤, 程业飞, 陆鹏, 等. 低聚壳聚糖季铵盐对青脚麻鸡生产性能、免疫和抗氧化功能的影响[J]. 南京农业大学学报, 2019, 42(3): 535–542.
WANG K, CHENG Y F, LU P, et al. Effect of quaternized chitooligosaccharide on growth perfor-mance, immune and antioxidant function of partridge shank chickens[J]. Journal of Nanjing Agricultural University, 2019, 42(3): 535–542. (in Chinese) |
| [40] | GORDON J, MANLEY N R. Mechanisms of thymus organogenesis and morphogenesis[J]. Development, 2011, 138(18): 3865–3878. DOI: 10.1242/dev.059998 |
| [41] | MAST J, GODDEERIS B M. Development of immunocompetence of broiler chickens[J]. Vet Immunol Immunopathol, 1999, 70(3-4): 245–256. DOI: 10.1016/S0165-2427(99)00079-3 |
| [42] | DENG X Z, LI X J, LIU P, et al. Effect of chito-oligosaccharide supplementation on immunity in broiler chickens[J]. Asian-Australas J Anim Sci, 2008, 21(11): 1651–1658. DOI: 10.5713/ajas.2008.80056 |
| [43] | MIAO Z G, ZHAO W X, GUO L P, et al. Effects of dietary supplementation of chitosan on immune function in growing Huoyan geese[J]. Poult Sci, 2020, 99(1): 95–100. DOI: 10.3382/ps/pez565 |
| [44] |
李晶. 血清总蛋白测定方法及临床意义[J]. 中国现代药物应用, 2012, 6(9): 28–29.
LI J. Determination of serum total protein and its clinical significance[J]. Chinese Journal of Modern Drug Application, 2012, 6(9): 28–29. DOI: 10.3969/j.issn.1673-9523.2012.09.019 (in Chinese) |
| [45] |
辛清武, 朱志明, 李丽, 等. 低聚壳聚糖对北京鸭生长性能和血清生化指标的影响[J]. 畜牧与兽医, 2018, 50(4): 28–32.
XIN Q W, ZHU Z M, LI L, et al. Effect of chitooligosaccharide on growth performance and serum biochemical indexes of Peking duck[J]. Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2018, 50(4): 28–32. (in Chinese) |
| [46] | EGGUM B O. Blood urea measurement as a technique for assessing protein quality[J]. Br J Nutr, 1970, 24(4): 983–988. DOI: 10.1079/BJN19700101 |
| [47] | BROWN J A, CLINE T R. Urea excretion in the pig: an indicator of protein quality and amino acid requirements[J]. J Nutr, 1974, 104(5): 542–545. DOI: 10.1093/jn/104.5.542 |
| [48] | LAN R X, LI Y X, CHANG Q Q, et al. Dietary chitosan oligosaccharides alleviate heat stress-induced intestinal oxidative stress and inflammatory response in yellow-feather broilers[J]. Poult Sci, 2020, 99(12): 6745–6752. DOI: 10.1016/j.psj.2020.09.050 |
| [49] |
肖定福, 唐志如, 印遇龙, 等. 壳聚糖对仔猪肠黏膜通透性及Occludin和ZO-1表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(6): 894–900.
XIAO D F, TANG Z R, YIN Y L, et al. Effects of chitosan on intestine permeability, Occludin and ZO-1 expression in piglets[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2012, 43(6): 894–900. (in Chinese) |
| [50] | OSHO S O, ADEOLA O. Impact of dietary chitosan oligosaccharide and its effects on coccidia challenge in broiler chickens[J]. Br Poult Sci, 2019, 60(6): 766–776. DOI: 10.1080/00071668.2019.1662887 |
| [51] | SUZUKI T. Regulation of intestinal epithelial permeability by tight junctions[J]. Cell Mol Life Sci, 2013, 70(4): 631–659. DOI: 10.1007/s00018-012-1070-x |
| [52] | XIONG X, YANG H S, WANG X C, et al. Effect of low dosage of chito-oligosaccharide supplementation on intestinal morphology, immune response, antioxidant capacity, and barrier function in weaned piglets[J]. J Anim Sci, 2015, 93(3): 1089–1097. DOI: 10.2527/jas.2014-7851 |
| [53] | YANG Y, PALM N W. Immunoglobulin A and the microbiome[J]. Curr Opin Microbiol, 2020, 56: 89–96. DOI: 10.1016/j.mib.2020.08.003 |
| [54] | MANTIS N, ROL N, CORTHÉSY B. Secretory IgA's complex roles in immunity and mucosal homeostasis in the gut[J]. Mucosal Immunol, 2011, 4(6): 603–611. DOI: 10.1038/mi.2011.41 |
| [55] | WAN J, JIANG F, XU Q S, et al. New insights into the role of chitosan oligosaccharide in enhancing growth performance, antioxidant capacity, immunity and intestinal development of weaned pigs[J]. RSC Adv, 2017, 7(16): 9669–9679. DOI: 10.1039/C7RA00142H |
| [56] |
冷智贤, 杨雪, 洑琴, 等. 低聚木糖和低聚壳聚糖及其复合制剂对肉鸡生产性能、免疫机能和盲肠菌群的影响[J]. 畜牧与兽医, 2014, 46(5): 13–18.
LENG Z X, YANG X, FU Q, et al. Effects of xylooligosaccharide and chitosan oligosaccharide alone or in combination on growth performance, immune function and cecal microflora of broilers[J]. Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2014, 46(5): 13–18. (in Chinese) |
| [57] |
迟晓枫. 日粮壳寡糖对肉鸡免疫相关血液学指标的影响[D]. 成都: 四川农业大学, 2017.
CHI X F. Effects of dietary chitosan oligosaccharides supplementation on immune-related hematological parameters in broilers[D]. Chengdu: Sichuan Agricultural University, 2016. (in Chinese) |
| [58] |
李阳, 常文环, 张姝, 等. 饲粮添加壳寡糖和干酪乳杆菌对肉鸡生长性能、肌肉品质及抗氧化性能的影响[J]. 动物营养学报, 2016, 28(5): 1450–1461.
LI Y, CHANG W H, ZHANG S, et al. Effects of dietary chitosan oligosaccharide and lactobacillus casei on growth performance, meat quality and antioxidant function of broilers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(5): 1450–1461. DOI: 10.3969/j.issn.1006-267X.2016.05.021 (in Chinese) |
| [59] |
白洁, 刘国华, 年芳, 等. 饲粮添加壳寡糖对肉鸡肉品质、抗氧化性能、小肠黏膜组织结构及肠道菌群的影响[J]. 动物营养学报, 2017, 29(12): 4485–4494.
BAI J, LIU G H, NIAN F, et al. Effects of dietary chitosan oligosaccharide on meat quality, antioxidant activity, intestinal mucosal structure and intestinal flora of broilers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2017, 29(12): 4485–4494. DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2017.12.029 (in Chinese) |
| [60] | MIAO Z G, GUO L P, LIU Y L, et al. Effects of dietary supplementation of chitosan on carcass composition and meat quality in growing Huoyan geese[J]. Poult Sci, 2020, 99(6): 3079–3085. DOI: 10.1016/j.psj.2020.03.025 |
| [61] |
夏党荣, 赵洁. 壳聚糖对天山雪鹅屠宰性能及肉品质的影响[J]. 中国饲料, 2010(17): 22–24.
XIA D R, ZHAO J. Effect of chitosan on slaughter performance and meat quality of Tianshan snow goose[J]. China Feed, 2010(17): 22–24. DOI: 10.3969/j.issn.1004-3314.2010.17.008 (in Chinese) |
| [62] |
樊路杰, 窦鸣乐, 王小宇, 等. 宰后肌肉抗氧化能力与肉品质的关系[J]. 动物营养学报, 2018, 30(5): 1676–1680.
FAN L J, DOU M L, WANG X Y, et al. Relationship between antioxidant capacity of postmortem muscle and meat quality[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2018, 30(5): 1676–1680. DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2018.05.010 (in Chinese) |
| [63] |
李华, 曾勇庆, 魏述东, 等. 猪宰后肌肉SOD与MDA的变化及其对肉质特性的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2010, 41(3): 257–261.
LI H, ZENG Y Q, WEI S D, et al. Changes of superoxide dismutase activity and malondialdehyde level in postmortem muscle and their association with meat quality in pigs[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2010, 41(3): 257–261. (in Chinese) |
| [64] | QU D F, HAN J Z. Investigation of the antioxidant activity of chitooligosaccharides on mice with high-fat diet[J]. R Bras Zootec, 2016, 45(11): 661–666. DOI: 10.1590/s1806-92902016001100004 |
| [65] |
丁雪梅, 迟晓枫, 李小聪, 等. 饲粮中添加壳寡糖对肉鸡抗氧化性能的影响[J]. 四川农业大学学报, 2017, 35(4): 568–573.
DING X M, CHI X F, LI X C, et al. Effects of chitosan oligosaccharides supplementation on serum antioxidation property in broilers[J]. Journal of Sichuan Agricultural University, 2017, 35(4): 568–573. (in Chinese) |