2. 新疆肉乳用草食动物营养重点实验室, 乌鲁木齐 830052
2. Xinjiang Key Laboratory of Meat and Milk Production Herbivore Nutrition, Urumqi 830052, China
动物肌内脂肪的含量和积累使肌肉表现出大理石花纹状，影响和决定着肉的品质；尤其是高档雪花牛肉，肌肉中的脂肪含量和分布越丰富，牛肉的品质也就越好，因此，如何实现动物肌内脂肪的合成与沉积具有重要的现实和科学意义。磷酸二羟基丙酮(dihydroxyacetone phosphate，DHAP)作为糖脂代谢的重要中间产物，参与到生物代谢，其代谢途径主要有两条：(1)糖代谢生成的二羟基丙酮，经二羟基丙酮激酶磷酸化，生成磷酸二羟基丙酮，在磷酸丙糖异构酶的催化下，生成3-磷酸甘油醛，经一系列酶催化最终生成丙酮酸，进入三羧酸循环，再经过一系列酶促反应生成生脂原料乙酰辅酶A，用来合成脂肪；(2)二羟基丙酮经二羟基丙酮激酶磷酸化后，生成磷酸二羟基丙酮，经扩散作用进入细胞内，在α-磷酸甘油脱氢酶的作用下，还原成α-磷酸甘油，再经甘油转酰基酶催化，与脂酰辅酶A最终合成三酰甘油[1-2]。国内针对磷酸二羟基丙酮的研究主要是利用其合成稀有单糖[3-4]，而磷酸二羟基丙酮直接使用对脂肪代谢的影响尚未见报道；作为其代谢前体的二羟基丙酮，用作新型饲料添加剂，用来提高生长降低体脂沉积和改善肉品品质[5-6]。
本试验旨在研究磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油及其关键代谢酶含量的影响，通过试验结果分析其对脂肪代谢的影响机制，为调控动物肌内脂肪的沉积提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料小鼠前脂细胞(3T3-L1)购于上海赛笠生物技术公司；磷酸二羟基丙酮(DHAP)、DMEM高糖培养基、胎牛血清(FBS)、蛋白消化液(EDTA)、磷酸盐缓冲液(PBS)、青链霉素试剂、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、地塞米松(DEX)、胰岛素(INS)购于美国GIBCO公司；试验所用ELISA试剂盒均由上海美轩生物技术公司生产。
1.2 试验设计试验于2016年10月至2017年7月在新疆农业大学肉乳用草食动物营养重点实验室进行。按照单因素试验设计，在细胞培养液中分别加入不同剂量的磷酸二羟基丙酮作为不同试验组：20 μmol·L-1(试验Ⅰ组)、50 μmol·L-1(试验Ⅱ组)、200 μmol·L-1(试验Ⅲ组)以及不添加的空白对照组(ck组)，并于0、36和72 h收集细胞及培养液冻存，以备送检；每组试验3个平行样，每个平行样3次重复。
1.3 测定指标及方法 1.3.1 测定指标试验收集的细胞冻存后送由上海赛笠生物技术公司检测。检测项目：果糖-6-磷酸激酶(6-PFK)、醛缩酶(FDA)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、丙酮酸脱氢酶E1(PDHE1)、二硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)、二硫辛酰胺脱氢酶(DLD)、乙酰CoA羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、甘油二酯转移酶2(DGAT2)、激素敏感脂肪酶(HSL)、三酰甘油水解酶(TGH)、肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT1)、三酰甘油(TG)、甘油二酯(DG)、游离脂肪酸(FFA)、丙酮酸(PA)、柠檬酸(CA)。
1.3.2 试剂配制完全培养基：89%DMEM高糖培养基+10%FBS胎牛血清+1%青链霉液；诱导液Ⅰ：完全培养基+0.5 mmol·L-1 IBMX+1 μmol·L-1 DEX+5 mg·L-1 INS；诱导液Ⅱ：完全培养基+5 mg·L-1 INS。
1.3.3 细胞培养参照郭秀玲等[7]方法将小鼠前脂细胞(3T3-L1)于含10%胎牛血清的完全培养基中，在37 ℃、5%CO2饱和湿度条件下培养，待细胞融合度达80%左右，将细胞传代接种到培养板中常规培养，融合度达80%时诱导，先用诱导液Ⅰ培养2 d, 再换诱导液Ⅱ培养2 d, 更换完全培养基培养第14天, 加入含0、20、50、200 μmol·L-1的磷酸二羟基丙酮完全培养基培养细胞，于0、36、72 h收集细胞和培养基进行后续检测。
1.3.4 代谢产物和酶含量的测定试验中各种代谢产物和酶含量的测定均参照闫莉等[8]的双抗体夹心法。每个样品平行测定3次。
1.4 统计方法数据用“平均值(Means)±标准差(SD)”表示，用SPSS22进行单因素方差分析，并用LSD方法进行多重比较。
2 结果 2.1 磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油合成中关键限速酶含量的影响由表 1可知，在36和72 h时，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的G6PD水平均极显著高于对照组(P < 0.01)，且试验各组之间差异不显著(P>0.05)；在36和72 h时，试验各组DLAT、DLD和FAS的含量均极显著高于对照组(P < 0.01)，试验各组之间差异不显著(P>0.05)；试验各组ACC含量差异均不显著(P>0.05)；在36和72 h时，试验各组DGAT2的含量显著或极显著高于对照组(P < 0.05，P < 0.01)，试验各组之间差异不显著(P>0.05)。
|
表 1 磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油合成中关键限速酶含量的影响 Table 1 Effect of dihydroxyacetone phosphate on key rate-limiting enzyme contents in TG synthesis in mouse adipocytes |
由表 2可知，在36和72 h时，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组HSL含量均极显著低于对照组(P < 0.01)，试验各组之间差异不显著(P>0.05)；试验各组TGH含量与对照组差异均不显著(P>0.05)；在36和72 h时，试验各组CPT1含量均极显著低于对照组(P < 0.01)，试验各组之间差异不显著(P>0.05)。
|
|
表 2 磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油分解代谢中关键限速酶含量的影响 Table 2 Effect of dihydroxyacetone phosphate on key rate-limiting enzyme contents in TG catabolism in mouse adipocytes |
由表 3可知，在36和72 h时，试验各组TG含量均极显著高于对照组(P < 0.01)，且试验各组之间差异不显著(P>0.05)；在36和72 h时，试验各组DG含量均显著低于对照组(P < 0.05)，试验各组之间差异不显著(P>0.05)；在36和72 h时，试验各组FFA含量均极显著低于对照组(P < 0.01), 试验各组之间差异不显著(P>0.05)；在36 h时，试验各组PA含量与对照组差异不显著(P>0.05)，在72 h时，试验各组PA含量均显著高于对照组(P < 0.05)；在36和72 h时，试验各组CA含量均极显著高于对照组(P < 0.01)，试验各组之间差异不显著(P>0.05)。
|
|
表 3 磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油代谢产物含量的影响 Table 3 Effect of dihydroxyacetone phosphate on the contents of TG metabolites in mouse adipocytes |
三酰甘油的存在是细胞将糖转化为脂肪储存起来的结果，其实质就是糖脂代谢过程中一系列的酶促反应，葡萄糖经过一系列关键限速酶的催化生成乙酰辅酶A，生成的乙酰辅酶A再经过乙酰辅酶A羧化酶、脂肪酸合成酶催化生成脂肪酸，再与糖代谢生成的中间产物α-磷酸甘油经过甘油酰基转移酶系的催化，最终生成三酰甘油，因此任何糖、脂代谢中关键限速酶含量与中间产物含量的变化都能直接影响到三酰甘油的代谢。G6PD是糖脂代谢过程中的关键限速酶，能够催化葡萄糖生成还原性辅酶A(NADPH)、乙酰辅酶A等用于脂肪酸的合成。本研究中(表 1)，在36和72 h时，试验各组的G6PD均极显著高于对照组(P < 0.01)，郑雅楠等[9]研究发现，G6PD表达增高，能够促进NADPH的含量增加，而Khu等[10]研究发现，糖代谢中G6PD升高，能够促进细胞对糖的利用，增加脂肪的合成和沉积，这与本研究结果一致。PDHE1、DLAT、DLD统称丙酮酸脱氢酶复合体，由葡萄糖代谢产生的丙酮酸经此酶系催化脱羧生成乙酰CoA，DLAT和DLD在该酶系中起到主要调节作用。在36和72 h时，试验各组DLAT和DLD的含量极显著高于对照组(P < 0.01)，程钰蓉等[11]研究发现，丙酮酸脱氢酶系活性增加，脂肪合成增强，其活性抑制能够降低脂肪的合成，与本研究结果相似，说明添加不同剂量的磷酸二羟基丙酮能够提高细胞中丙酮酸脱氢酶系的活性，从而促进丙酮酸的代谢。
以上糖代谢的酶促反应中，由G6PD催化反应产生的NADPH+H+为脂肪的生物合成提供了所需的大量氢体，丙酮酸脱氢酶复合体则催化丙酮酸生成脂肪合成的原料乙酰CoA，这些由糖代谢生成的氢体和乙酰CoA存在于胞液中，接下来再经过脂代谢关键合成酶ACC与FAS的催化，生成脂肪酸链，用于合成三酰甘油。本研究中，试验各组的G6PD与丙酮酸脱氢酶复合体的含量极显著提高，说明试验各组生成的生脂原料和氢体增多。
ACC能够催化乙酰CoA生成丙二酰辅酶A，是催化合成脂肪酸的第一步，也是最重要的一步，生成的丙二酰辅酶A的含量直接决定着脂肪酸的合成量。本研究中(表 1)，添加磷酸二羟基丙酮的试验各组能够提高ACC的含量，在36和72 h时，试验Ⅰ组ACC的含量就比对照组分别高出了9.62%和9.69%，李亮等[12]研究发现，ACC的含量升高，机体内脂肪的合成沉积增加；Mao等[13]和Barber等[14]研究证实，ACC活性增加能够促进细胞三酰甘油的合成与沉积，这与本研究结果一致。FAS是一个多酶复合体，催化乙酰CoA生成脂肪酸。试验结果表明，添加不同剂量磷酸二羟基丙酮能够极显著提高FAS的含量(P < 0.01)，刘作华等[15]研究发现，FAS表达升高，脂肪的含量增加，而Dentin等[16]研究也证实其活性的高低直接控制脂肪合成的强弱，其表达水平升高能够显著增加三酰甘油的沉积，充分证明了本研究结果。在ACC和FAS催化的脂代谢反应中，本研究中试验各组的ACC和FAS极显著高于对照组，说明试验各组合成的脂肪酸量也显著高于对照组。DGAT2是催化甘油二酯转变成三酰甘油的限速酶，能够催化α-磷酸甘油(由磷酸二羟基丙酮还原得到)和脂肪酸生成三酰甘油。由本试验结果可知，在36 h时，试验各组DGAT2含量显著高于对照组(P < 0.05), 72 h时，极显著高于对照组水平(P < 0.01)；Nestel[17]、张晓图等[18]研究发现，DGAT2表达和活性升高，三酰甘油合成加强，这与本研究结果一致。因为试验各组的三酰甘油合成量强于对照组，所以试验各组的三酰甘油含量也显著高于对照组。
3.2 磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油分解代谢中关键限速酶含量的影响三酰甘油的存在是一个合成和分解动态平衡的结果，其在合成的同时分解也在进行。HSL在脂肪分解中起到决定性作用，是分解脂肪的关键限速酶。本研究中(表 2)，试验各组HSL的含量均极显著低于对照组水平(P < 0.01)，这与Lorente-Cebrin等[19]与Xu等[20]研究结果一致，HSL表达抑制，脂肪分解减少；说明磷酸二羟基丙酮能够极显著降低HSL含量和活性，从而抑制三酰甘油的分解。TGH也是催化三酰甘油水解的重要脂肪酶，Cornaciu等[21]、Chakrabarti和Kandror[22]和Serr等[23]研究发现，TGH的表达抑制能够促进三酰甘油的沉积，何微[24]研究发现，高脂营养水平促进脂肪合成和沉积时，TGH表达显著被抑制，而袁禹惠[25]研究发现，高脂营养水平能够抑制脂肪的沉积，但是对TGH酶的表达和含量影响并不显著，这与本研究结果一致，表明添加磷酸二羟基丙酮对TGH整体含量影响不显著(P>0.05)。
肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT1)是转运活化的脂肪酸(脂酰CoA)进入线粒体进行氧化分解的关键限速酶。本研究中(表 2)，试验各组CPT1的含量在36和72 h时均极显著低于对照组(P < 0.01)，试验各组之间差异均不显著(P>0.05)，胡伟[26]、董婧[27]、Abu-Elheiga等[28]研究证实，抑制CPT1的表达和含量能够抑制脂肪的氧化，增加脂肪的沉积，与本研究结果一致，说明磷酸二羟基丙酮能够降低脂肪细胞内CPT1的含量，抑制脂肪酸的β氧化分解，从而增加三酰甘油在脂肪细胞内的沉积。
本研究中，试验各组HSL和CPT1含量均极显著低于对照组，说明试验各组生成的三酰甘油分解速率也显著低于对照组，这也是试验各组三酰甘油含量显著高于对照组的原因之一。
3.3 磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油代谢关键产物含量的影响本研究结果可知(表 3)，试验各组TG的含量在36和72 h时均极显著高于对照组(P < 0.01)，试验各组之间差异不显著(P>0.05)，推测可能是磷酸二羟基丙酮一方面通过提高ACC、FAS酶的活性，促进FFA的合成；另一方面磷酸二羟基丙酮经过还原作用生成α-磷酸甘油，与之前生成的FFA经甘油二酯转移酶系催化生成三酰甘油，而本研究中FFA含量极显著降低，DGAT2酶含量极显著升高能够说明这些。杨少鹏[2]证实，磷酸二羟基丙酮在生物体内一是参与糖代谢，二是用于合成三酰甘油[29]，也能够证明本研究结果，说明磷酸二羟基丙酮能够促进小鼠脂肪细胞三酰甘油的合成和沉积。
DG和FFA既是TG的合成前体同时也是其分解产物，在本研究中，试验各组FFA的含量均极显著低于对照组(P < 0.01)，试验各组DG含量均显著低于对照组(P < 0.05)，这与杨竹青等[30]通过烟酸抑制三酰甘油分解从而显著降低细胞中FFA含量结果一致，因为添加磷酸二羟基丙酮能够显著降低三酰甘油水解酶HSL的含量，极显著提高DGAT2和TG含量，更多的FFA和DG用于合成TG, 因此试验各组FFA和DG的含量显著降低。
PA、CA作为糖脂代谢的关键中间产物，构成柠檬酸-丙酮酸循环，能够将合脂原料乙酰CoA从线粒体中转运至胞液中，用于合成脂肪。在本研究中，试验各组PA的含量在72 h均高出对照组水平(P < 0.05)，试验各组CA含量在36和72 h均极显著高出对照组水平(P < 0.01)，推测，一是添加的磷酸二羟基丙酮本身参与代谢，生成更多PA和CA，二是由于添加了磷酸二羟基丙酮，多余的葡萄糖用于代谢生成PA和CA，因此能够生成并转运更多的生脂原料—乙酰CoA，Wang等[31]研究发现，在脂代谢的调控过程中，多余的葡萄糖会诱导PA、CA、ACC及FAS等表达，从而促进脂肪的合成，这与本研究结果一致。
4 结论外源性添加磷酸二羟基丙酮能够极显著提高小鼠脂肪细胞三酰甘油合成代谢中G6PD、DLAT、DLD、FAS等酶的含量，同时极显著降低三酰甘油分解代谢中HSL与CPT1酶的含量；从而增强小鼠脂肪细胞中三酰甘油的含量和沉积。
| [1] |
邹思湘.
动物生物化学[M]. 4版. 北京: 中国农业出版社, 2012: 190-200.
ZOU S X. Animal biochemistry[M]. 4th ed. Beijing: China Agriculture Press, 2012: 190-200. (in Chinese) |
| [2] |
杨少鹏. 由甘油制备1, 3-二羟基丙酮的合成研究[D]. 郑州: 郑州大学, 2016: 3-11.
YANG S P. Study on synthesis of 1, 3-dihydroxyacetone from Glycerol[D]. Zhengzhou: Zhengzhou University, 2016: 3-11. (in Chinese) |
| [3] |
李子杰. 利用磷酸二羟基丙酮依赖型醛缩酶在体外和体内进行稀有单糖的合成[D]. 济南: 山东大学, 2012: 3-19.
LI Z J. Enzymatic synthesis of rare sugars with dihydroxyacetone phosphate-dependent aldolases in vitro and in vivo[D]. Ji'nan: Shandong University, 2012: 3-19. (in Chinese) |
| [4] |
吴晓茹. 利用磷酸二羟基丙酮依赖型醛缩酶和甘油激酶合成稀有糖[D]. 无锡: 江南大学, 2016: 4-9.
WU X R. Enzymatic synthesis of rare sugars with dihydroxyacetone phosphate-dependent aldolases and glycerol kinase[D]. Wuxi: Jiangnan University, 2016: 4-9. (in Chinese) |
| [5] |
张文刚, 黄家莺, 顾欣, 等. 新型的饲料添加剂——二羟基丙酮[J]. 上海畜牧兽医通讯, 2015(3): 64–65.
ZHANG W G, HUANG J Y, GU X, et al. The new feed additive-dihydroyacetone[J]. Shanghai Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2015(3): 64–65. (in Chinese) |
| [6] |
张文刚, 吴昊旻, 黄家莺, 等. 二羟基丙酮对肥育猪生长性能、胴体组成和肉质指标的影响[J]. 饲料研究, 2017(4): 1–3, 40.
ZHANG W G, WU H M, HUANG J Y, et al. Effect of dihydroyacetone on growth performance, carcass composition and meat quality of fatten pigs[J]. Feed Research, 2017(4): 1–3, 40. (in Chinese) |
| [7] |
郭秀玲, 徐民岗, 张秀丽, 等. 小鼠3T3-L1前脂肪细胞培养与诱导分化方法的建立[J]. 中国药物与临床, 2013, 13(12): 1542–1544.
GUO X L, XU M G, ZHANG X L, et al. A novel approach for culture and induced differentiation of mouse 3T3-L1 preadipocytes[J]. Chinese Remedies & Clinics, 2013, 13(12): 1542–1544. (in Chinese) |
| [8] |
闫莉, 许言午, 王晓梁, 等. 双抗体夹心法检测3-硝基酪氨酸方法的建立及应用[J]. 中国应用生理学杂志, 2009, 25(4): 569–572.
YAN L, XU Y W, WANG X L, et al. Establishment and application of double-antibody sandwich Elisa for determination of 3-nitrotyrosine[J]. Chinese Journal of Applied Physiology, 2009, 25(4): 569–572. (in Chinese) |
| [9] |
郑雅楠, 陈少云, 刘文洪, 等. 基于己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶共表达的辅酶NADPH高效再生[J]. 微生物学通报, 2016, 43(12): 2619–2626.
ZHENG Y N, CHEN S Y, LIU W H, et al. Efficient NADPH regeneration based on co-expression of hexokinase and glucose-6-phosphate dehydrogenase[J]. Microbiology China, 2016, 43(12): 2619–2626. (in Chinese) |
| [10] | KHU L Y, STOREY K B, RUBTSOV A M, et al. Regulation of glucokinase activity in liver of hibernating ground squirrel Spermophilus undulatus[J]. Biochemistry (Mosc), 2014, 79(7): 927–932. |
| [11] |
程钰蓉, 孙志杰, 崔球. 丙酮酸脱氢酶竞争性抑制剂调控裂殖壶菌脂肪酸合成的研究[J]. 食品工业科技, 2016, 37(16): 161–166.
CHENG Y R, SUN Z J, CUI Q. Research of a specific competitive inhibitor of pyruvate dehydrogenase complex on Aurantiochytrium synthesizing fatty acids[J]. Science and Technology of Food Industry, 2016, 37(16): 161–166. (in Chinese) |
| [12] |
李亮, 程彦伟. 乙酰辅酶A羧化酶在治疗肥胖中的潜在作用[J]. 生命的化学, 2007, 27(2): 180–182.
LI L, CHENG Y W. The potential effects of acetyl-CoA carboxylase in curing obesity[J]. Chemistry of Life, 2007, 27(2): 180–182. (in Chinese) |
| [13] | MAO J Q, DEMAYO F J, LI H G, et al. Liver-specific deletion of acetyl-CoA carboxylase 1 reduces hepatic triglyceride accumulation without affecting glucose homeostasis[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006, 103(22): 8552–8557. DOI: 10.1073/pnas.0603115103 |
| [14] | BARBER M C, PRICE N T, TRAVERS M T. Structure and regulation of acetyl-CoA carboxylase genes of metazoa[J]. Biochim Biophys Acta, 2005, 1733(1): 1–28. DOI: 10.1016/j.bbalip.2004.12.001 |
| [15] |
刘作华, 杨飞云, 孔路军, 等. 日粮能量水平对生长育肥猪肌内脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 934–941.
LIU Z H, YANG F Y, KONG L J, et al. Effects of dietary energy level on the content of intramuscular fat and mRNA expression for fatty acid synthase and hormone-sensitive lipase in growing-finishing pigs[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2007, 38(9): 934–941. (in Chinese) |
| [16] | DENTIN R, BENHAMED F, PÉGORIER J P, et al. Polyunsaturated fatty acids suppress glycolytic and lipogenic genes through the inhibition of ChREBP nuclear protein translocation[J]. J Clin Invest, 2005, 115(10): 2843–2854. DOI: 10.1172/JCI25256 |
| [17] | NESTEL P J. Fish oil and cardiovascular disease:Lipids and arterial function[J]. Am J Clin Nutr, 2000, 71(S1): 228S–231S. |
| [18] |
张晓图, 杜晨红, 丁小娟, 等. 多不饱和脂肪酸的生物学功能及其在动物生产中的应用[J]. 动物营养学报, 2017, 29(9): 3059–3067.
ZHANG X T, DU C H, DING X J, et al. Biological functions of polyunsaturated fatty acids and its application in animal production[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2017, 29(9): 3059–3067. (in Chinese) |
| [19] | LORENTE-CEBRIÁN S, KULYTÉ A, HEDÉN P. Relationship between site-specific HSL phosphorylation and adipocyte lipolysis in obese women[J]. Obes Facts, 2011, 4(5): 365–371. DOI: 10.1159/000334036 |
| [20] | XU C, HE J H, JIANG H F, et al. Direct effect of glucocorticoids on lipolysis in adipocytes[J]. Mol Endocrinol, 2009, 23(8): 1161–1170. DOI: 10.1210/me.2008-0464 |
| [21] | CORNACIU I, BOESZOERMENYI A, LINDERMUTH H, et al. The minimal domain of adipose triglyceride lipase (ATGL) ranges until leucine 254 and can be activated and inhibited by cgi-58 and G0S2, respectively[J]. PLoS One, 2011, 6(10): e26349. DOI: 10.1371/journal.pone.0026349 |
| [22] | CHAKRABARTI P, KANDROR K V. FoxO1 controls insulin-dependent adipose triglyceride lipase (ATGL) expression and lipolysis in adipocytes[J]. J Biol Chem, 2009, 284(20): 13296–13300. DOI: 10.1074/jbc.C800241200 |
| [23] | SERR J, SUH Y, LEE K. Regulation of adipose triglyceride lipase by fasting and refeeding in avian species[J]. Poult Sci, 2009, 88(12): 2585–2591. DOI: 10.3382/ps.2009-00265 |
| [24] |
何微. 辛伐他汀和非诺贝特对NAFLD大鼠ATGL酶和TNF-α表达调控的实验研究[D]. 广州: 南方医科大学, 2013: 3-19.
HE W. An experimental study on the regulation of ATGL and TNF-a for NAFLD rats by Fenofibrate and Simvastatin[D]. Guangzhou: Southern Medical University, 2013: 3-19. (in Chinese) |
| [25] |
袁禹惠. 饲料中脂肪及花生四烯酸水平对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)稚鱼生长、脂肪酸组成及代谢相关基因表达的影响[D]. 青岛: 中国海洋大学, 2015: 2-9.
YUAN Y H. Effects of dietary lipid and arachidonic acid level on growth performance, fatty acid composition and genes expression of metabolism related enzymes of larval half-smooth tongue sole, Cynoglossus semilaevis[D]. Qingdao: Ocean University of China, 2015: 2-9. (in Chinese) |
| [26] |
胡伟. 草鱼脂代谢相关酶的分离纯化、分子克隆、酶动力学性质及对铜和锌的响应研究[D]. 武汉: 华中农业大学, 2015: 4-11.
HU W. Isolation, purification, cloning, kinetic properties of enzymes related to lipid metabolism and response to copper and zinc in Ctenopharyngodon idella[D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University, 2015: 4-11. (in Chinese) |
| [27] |
董婧. 肉碱对鲤鱼幼鱼脂肪酸代谢调控作用的研究[D]. 长春: 吉林农业大学, 2014: 2-6.
DONG J. Studies on regulatory mechanism of supplementing L-carnitine on fatty acids metabolism in juvenile common carp (Cyprinus carpio)[D]. Changchun: Jilin Agricultural University, 2014: 2-6. (in Chinese) |
| [28] | ABU-ELHEIGA L, MATZUK M M, ABO-HASHEMA K A H, et al. Continuous fatty acid oxidation and reduced fat storage in mice lacking acetyl-CoA carboxylase 2[J]. Science, 2001, 291(5513): 2613–2616. DOI: 10.1126/science.1056843 |
| [29] | STANKO R T, FERGUSON T L, NEWMAN C W, et al. Reduction of carcass fat in swine with dietary addition of dihydroxyacetone and pyruvate[J]. J Anim Sci, 1989, 67(5): 1272–1278. DOI: 10.2527/jas1989.6751272x |
| [30] |
杨竹青, 瞿明仁, 赵向辉, 等. 烟酸对反刍动物脂类代谢和肉质的影响及其作用机制[J]. 动物营养学报, 2013, 25(6): 1150–1157.
YANG Z Q, QU M R, ZHAO X H, et al. Effects of nicotinic acid on lipid metabolism and meat quality and its mechanisms in ruminants[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2013, 25(6): 1150–1157. (in Chinese) |
| [31] | WANG Y X, JONES VOY B, URS S, et al. The human fatty acid synthase gene and de novo lipogenesis are coordinately regulated in human adipose tissue[J]. J Nutr, 2004, 134(5): 1032–1038. DOI: 10.1093/jn/134.5.1032 |