钙磷均为维持水貂健康生长的常量元素，也是维持水貂生长代谢、骨骼发育的必要元素。适宜的钙磷含量对水貂的健康生长十分关键，过多或缺乏都会对水貂造成不利的影响，李光玉等[1]指出，钙磷缺乏会导致水貂出现牙龈肿大、牙齿松动、嘴鼻变大等症状。维生素D可促进机体对钙磷的吸收，调节骨骼中钙磷的沉积和溶解，对机体具有十分重要的调节作用。钙磷比也是影响机体对钙磷吸收十分重要的因素。中华人民共和国行业标准《水貂配合饲粮》推荐钙磷比为1~2[2]。刘帅等[3]对冬毛期水貂的研究建议冬毛期水貂饲粮磷水平为1.4%，钙磷比为1.5~2.0。目前国内外对水貂适宜维生素D含量的研究结果比较宽泛，程世鹏等[4]给出每日每只水貂冬毛生长期维生素D的需要量为30~40 IU；也有研究[5]指出，水貂饲粮每千克干物质中维生素D含量应不少于400 IU；更有研究[6]表明，饲粮干物质中维生素D含量在5 000 IU·kg-1时对水貂没有毒性作用；当维生素D剂量超过100 000 IU·kg-1时，在短时间内即出现毒性作用[7]。G.Hilleman[8]研究表明，从7月到打皮时期，水貂饲粮干物质中维生素D含量为10 000、25 000和40 000 IU·kg-1时毛皮品质没有显著差异。因此，探究水貂饲粮精准的维生素D和钙水平显得尤为重要。
本试验通过固定饲粮钙磷比，配制不同维生素D和钙水平的饲粮，研究饲粮不同维生素D和钙水平对冬毛期水貂生产性能、血清生化指标及脏器指数的影响，以筛选出适宜冬毛期水貂的饲粮维生素D和钙水平，为精准确定水貂饲粮中维生素D及钙的水平奠定基础，为水貂生产实践提供理论指导。
1 材料与方法 1.1 试验动物饲养试验地点为农业部长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站。选取(135±5)日龄健康短毛黑水貂公貂117只，随机分成9组(Ⅰ~Ⅸ组)，且同窝水貂不在同一组内以消除遗传因素带来的影响，每组13个重复，每个重复1只，各重复之间水貂初始体重差异不显著(P＞0.05)。
1.2 试验设计与饲粮试验采用3×3双因素随机试验设计，饲粮钙磷比固定为1.7，基础饲粮中维生素D水平为2 300 IU·kg-1，钙水平为2.0%，设3个维生素D(维生素D3形式)水平(2 300、4 300和6 300 IU·kg-1)和3个钙水平(2.00%、2.40%和2.80%)。参考NRC(1982)[9]以及相关文献[10]中关于水貂冬毛期各营养物质需要量，以海杂鱼、鸡骨架、鸡头、鸡腺胃、鸡肝、豆油膨化玉米粉为原料，共配制9种冬毛期水貂试验饲粮，其组成及营养水平见表 1。9组水貂饲喂的饲粮分别为Ⅰ组2.00%钙与2 300 IU·kg-1维生素D，Ⅱ组2.00%钙与4 300 IU·kg-1维生素D，Ⅲ组2.00%钙与6 300 IU·kg-1维生素D，Ⅳ组2.40%钙与2 300 IU·kg-1维生素D，Ⅴ组2.40%钙与4 300 IU·kg-1维生素D，Ⅵ组2.40%钙与6 300 IU·kg-1维生素D，Ⅶ组2.80%钙与2 300 IU·kg-1维生素D，Ⅷ组2.80%钙与4 300 IU·kg-1维生素D，Ⅸ组2.80%钙与6 300 IU·kg-1维生素D。预饲期13 d，正试期60 d。
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表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
试验开始前，对水貂接种犬瘟热和细小病毒疫苗。试验水貂均单笼饲养，每日07:30与15:30各饲喂1次，自由饮水，每日记录实际采食量。正式试验开始后，每日观察并记录试验水貂的健康状况。
1.4 水貂生长性能的测定水貂体重为试验结束时水貂的空腹活体重，水貂的体长为将水貂放于水平地面上，鼻尖至尾根的距离。皮长为取皮刮油烘干后在楦板上鼻尖至尾根的距离。毛皮品质参考《中国毛皮兽饲养技术大全》中的参数将水貂毛皮品质划分为1~5分进行评价并记录[11]。
1.5 测定指标及方法饲粮中粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、粗灰分、Ca、P参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[12]测定。维生素D水平参照GB /T 17818-2010采用高效液相色谱法检测。饲养试验结束时，每组随机选取9只健康水貂，称重后心采血5 mL，置于促凝采血管中，经在4 ℃，4 000 r·min-1离心8 min，将分离出的血清分装在1.5 mL编好号的Eppendorf管中，置于-80 ℃保存，备用。血清中的总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的测定采用试剂盒，按照试剂盒说明，使用VITALIB-E全自动生化分析仪测定，球蛋白(GLOB)由白蛋白差值计算获得。
1.6 水貂脏器指数测定及计算上述各组中9只水貂经心采血后立即处死，取皮后迅速取出心、肝、脾和肾，用滤纸吸干脏器表面的血液后进行称重记录，然后计算各脏器指数：脏器指数=器官重量÷体重×100%。
1.7 数据处理数据以“平均值±标准差”表示，用Excel 2010进行整理并用SAS 9.4软件中的一般线性模型(GLM)程序进行有交互作用的双因素方差分析(two-way ANOVA)，并采用Duncan氏法进行多重比较，P < 0.05为差异显著，P < 0.01为差异极显著。
2 结果 2.1 饲粮维生素D和钙水平对水貂生产性能的影响如表 2所示，饲粮维生素D和钙水平对水貂体重、体长和毛皮品质均无显著影响(P > 0.05)。钙水平对皮长有显著的影响(P < 0.05)，0%添加水平显著高于0.4%和0.8%添加水平(P < 0.05)。
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表 2 饲粮维生素D和钙水平对水貂生产性能的影响 Table 2 Effects of dietary VD and Ca levels on production performance of mink |
如表 3所示，饲粮钙水平对水貂血清中TP、ALB和GLOB均无显著影响(P > 0.05)。维生素D水平对TP有显著的影响(P < 0.05)，2 000 IU·kg-1添加水平显著高于4 000 IU·kg-1添加水平(P < 0.05)。
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表 3 饲粮维生素D和钙水平对水貂血清中蛋白质代谢相关指标的影响 Table 3 Effects of dietary VD and Ca levels on protein metabolic indexes in serum of mink |
由表 4可以看出，维生素D和钙添加水平对水貂血清TG、HDL水平存在显著的交互作用(P < 0.05)，对水貂血清LDL水平存在极显著的交互作用(P < 0.01)。维生素D添加水平显著影响水貂血清TG浓度(P < 0.05)，2 000 IU·kg-1添加水平显著低于0 IU·kg-1添加水平(P < 0.05)。钙添加水平显著影响水貂血清HDL浓度(P < 0.05)，0%添加水平显著低于0.4%和0.8%添加水平(P < 0.05)。钙添加水平极显著影响水貂血清LDL浓度(P < 0.01)，0.8%钙添加水平极显著低于另两个添加水平(P < 0.01)。维生素D和钙添加水平对水貂血清CHO浓度均无显著影响(P > 0.05)。
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表 4 饲粮维生素D和钙水平对水貂血清中脂肪代谢相关指标的影响 Table 4 Effects of dietary VD and Ca levels on fat metabolic indexes in serum of mink |
如表 5所示，饲粮维生素D水平对水貂肾脏指数有极显著的影响(P < 0.01)，以4 000 IU·kg-1维生素D添加水平最低。饲粮钙水平对水貂心脏指数、肝脏指数、脾脏指数均有显著的影响(P < 0.05)，均以0.8%钙添加水平最高。饲粮维生素D和钙水平对水貂脏器指数无显著的交互作用(P > 0.05)。
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表 5 饲粮维生素D和钙水平对水貂脏器指数的影响 Table 5 Effects of dietary VD and Ca levels on organ indexes of mink |
水貂体重、体长和皮长等生产性能指标受多种因素影响，如水貂品种、饲养环境和营养水平等[13], 其毛皮品质亦是如此[13]。尺码和品质是衡量水貂皮张价值的两个主要因素，而打皮时水貂的体重和皮长与皮张的尺码显著相关[14]。维生素D是动物生长所必需的营养素，适量添加可促进动物生长。大量研究[15-20]表明，适宜维生素D水平可以提高肉鸡的生长性能。也有研究[21-23]表明，适宜的钙水平可以提高鸡的生长性能。在本试验条件下，钙与维生素D添加水平对水貂的末体重没有显著的影响。钙水平对其皮长有显著影响，在0%添加水平时有最大值。不同饲粮维生素D和钙水平对水貂毛皮品质影响不显著，可能维生素D和钙对水貂的影响主要在代谢等其他方面上。
3.2 饲粮维生素D和钙水平对水貂血清生化指标的影响 3.2.1 饲粮维生素D和钙水平对水貂血清中蛋白质代谢相关指标的影响动物对饲粮中蛋白质的利用程度可由血清中蛋白质的相关指标直接反映。TP具有维持血管内正常胶体渗透压、运输代谢物、维持酸碱平衡、参与免疫等多种功能[24]。TP由ALB和GLOB组成，能够反映肝的合成功能以及肾病变造成的蛋白质丢失等情况。本试验条件下，钙水平对水貂血清中蛋白质代谢相关指标无显著影响。当饲粮维生素D添加水平为2 000 IU·kg-1时，水貂血清中TP、ALB和GLOB的水平均最高，在同等饲粮组成的情况下，说明该水平下蛋白质的利用率相对较高。王丽等[25]研究表明，在日粮中添加维生素D3能显著提高笼养育成蛋鸭血清总蛋白及白蛋白的浓度，球蛋白浓度有升高的趋势。李万佳[26]对獭兔的研究也得到相似的结果，这与本试验结果一致。但在本试验中, 当饲粮维生素D添加量为4 000 IU·kg-1时，蛋白质代谢相关指标有所降低，可能是由于饲粮维生素D量过高，引起了动物机体不适，从而导致蛋白质代谢利用率有所降低。
3.2.2 饲粮维生素D和钙水平对水貂血清中脂肪代谢相关指标的影响LDL、HDL是运载胆固醇的脂蛋白，用以维持血浆脂蛋白浓度的稳定，维持细胞脂类保持适当的浓度。长期不适宜的TG、CHO、LDL、HDL浓度不利于动物体内血脂代谢和转运，易造成动物高脂血症、动脉粥样硬化、肝细胞性黄疽等病症。研究[27-28]表明，高钙水平能够降低动物体内的脂肪含量。徐超等[29]研究发现，膳食钙有明显的降低血浆胆固醇浓度的作用。王海英等[30]研究指出，高钙膳食降低饮食诱导肥胖大鼠的体脂含量，改善血脂代谢紊乱状态和胰岛素抵抗，这是高钙通过促进瘦素分泌，降低神经肽Y分泌，升高血中游离T3和生长激素水平实现的。维生素D能促进机体对钙的吸收，陈娟[28]研究指出，添加维生素D显著降低肉仔鸡血清低密度脂蛋白浓度。李万佳[26]对獭兔的研究并未发现维生素D添加水平对血清TG、CHO、HDL、LDL有显著影响。本试验条件下，钙添加水平显著影响水貂血清LDL、HDL浓度，且钙添加水平为0.8%时，水貂脂肪水平偏低，与上述研究结果一致。
3.3 饲粮维生素D和钙水平对水貂脏器指数的影响脏器指数是评价脏器中物质毒性的常用指标[13]，都能较为方便和敏感的反映出脏器中物质的毒性程度。器官的大小在一定程度上能够反映机体器官的功能强弱及受损情况[13]，内脏器官的充分发育能使机体对营养物质充分的消化吸收。心是循环系统中的动力，维持血液循环，推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物，使细胞维持正常的代谢和功能。肝是身体内以代谢功能为主的器官，具有储存糖原(肝糖)、分泌蛋白质合成、去毒素等功能。若动物肝出现损伤，肝吸收营养、代谢和清除毒素的能力也相应减弱。脾是外周免疫器官，可产生大量的淋巴细胞和丰富的B细胞，并可分泌特殊的抗体，因此可参与机体细胞免疫和体液免疫。肾对维持机体内环境稳定具有重要的作用。肾是重要的排泄器官，其主要功能是过滤形成尿并排出代谢废物，调节体内的电解质和酸碱平衡。肾具有内分泌功能，通过产生肾素、促红细胞生成素、前列腺素、1, 25-(OH)2-D3等，参与调节血压、红细胞生成和钙的代谢。所以，肾的结构和功能异常，上述正常功能均可受到影响，出现一系列临床症状。研究表明[31]，饲粮钙水平对0~7周龄贵妃鸡心、肝、脾、肾指数均无显著影响，这与本研究结果一致。张淑云[32]的研究结果表明，增加维生素D添加量有利于肉鸡细胞和体液免疫功能的增强，而高水平钙则主要不利于肉鸡体液免疫功能。维生素D主要通过1, 25-(OH)2-D3来发挥免疫调节作用，可直接作用于T淋巴细胞，诱导调节性T淋巴细胞的产生[33]。有研究表明，1, 25-(OH)2-D3增强单核/巨噬细胞的分化和活化，用1, 25-(OH)2-D3治疗后，削弱的免疫功能可以得到加强[34]，适宜钙能调节淋巴细胞分裂，介导巨噬细胞的吞噬功能[35]。汪德勤等[36]研究发现，用缺乏维生素D的饲料饲喂小鼠后，其主要脏器指数显著变小。解俊美[16]研究结果表明，饲粮适宜维生素D含量显著提高蛋雏鸭脾脏指数。李思明[37]对丝毛鸡的研究也得到相似的结果。在本试验条件下，高钙水平显著提高了冬毛期水貂的心、肝、脾脏指数，维生素D添加水平为0~2 000 IU·kg-1时，肾脏指数最高。
4 结论综合以上指标，在本试验条件下得出，当水貂饲粮中添加0~2 000 IU·kg-1维生素D，总维生素D含量为2 300~4 300 IU·kg-1时，能够促进水貂蛋白质代谢，提高水貂肾脏指数；当水貂饲粮中添加0.8%钙、饲粮中总钙含量为2.8%时，能够提高水貂心、肝、脾脏指数。
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