铁是水貂维持生命和生长发育所必需的的微量元素之一。研究表明，铁参与动物体内血红蛋白的合成，又是生物氧化剂脱氧核糖核酸合成所必需的的含铁酶的成分，在动物机体内铁含量的多少不仅影响动物的生长发育和代谢过程，而且影响动物的生理防御机能[1-4]。程小冬等[5]研究表明，日粮添加不同水平的铁对二月龄新西兰兔肾脏指数有影响。刘庆华等[6]研究表明，与正常组相比，铁过量或铁缺乏，均会影响血清中血红蛋白、球蛋白、总蛋白、丙二醛含量，以及超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶的活性。王天成等[7]研究发现，通过灌胃给小鼠固定剂量(5 mg·kg-1)的纳米纯铁粉与对照组相比，能够显著提高小鼠肝脏系数，显著提高乳酸脱氢酶(LDH)、总胆汁酸(TBA)等指标，且能够降低小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和尿素氮(SUN)等指标水平。陈凤芹等[8]报道，150 mg·kg-1的甘氨酸亚铁能够显著提高仔猪血清中IgG含量。目前国内外尚未明确给出冬毛期水貂获得最佳生产性能时饲粮中铁的适宜水平，并且关于饲粮中铁的含量对水貂血清生化指标及脏器指数的报道相对较少，水貂饲粮的配制还主要参考NRC(1982) 的推荐量[9]，我国水貂的营养需要量研究起步较晚，至今没有制定水貂的饲养标准，水貂铁的营养需要量的研究有待于进一步通过饲养试验进行科学确定。
因此，本研究通过饲粮中添加不同水平的铁，探讨其对冬毛期水貂生产性能、血清中蛋白质代谢指标及相关酶活性及脏器指数的影响，为完善水貂饲养标准提供参考，为水貂饲粮生产中铁的添加量提供科学依据，同时为探究铁在水貂体内的营养作用机制奠定基础。
1 材料与方法 1.1 试验动物与试验方法于中国农业科学院特产研究所毛皮动物实验基地，选取145日龄左右，平均体重为(1.74±0.14) kg的75只健康雄性水貂，随机分为5组，每组15只水貂，单笼饲养。参考NRC(1982) 相关营养指标配制水貂饲粮，采用硫酸亚铁作为铁源。饲粮中添加铁的水平分别为0 (Fe0)、100(Fe100)、200 (Fe200)、300 (Fe300)、400 mg·kg-1(Fe400)，试验预试7 d，正试期60 d。每日早晚各饲喂1次，自由饮水。饲养试验结束时记录水貂体重、体长和毛皮品质。基础饲粮组成和营养水平见表 1。
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表 1 基础饲粮组成和营养水平 Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) |
水貂体重为试验结束时水貂的空腹活体重，水貂的体长为将水貂放于水平地面上，鼻尖至尾根的距离，毛皮品质参考《中国毛皮兽饲养技术大全》中的参数将水貂毛皮品质划分为1~5分进行评价并记录[10]。
1.3 血清样品的制备及指标测定饲养试验结束时，每组随机选取8只健康水貂，称重后心采血5 mL，置于促凝采血管中，经在4 ℃，4 000 r·min-1离心8 min，将分离出的血清分装在1.5 mL编好号的Eppendorf管中，置于-80 ℃保存，备用。血清中的总蛋白、白蛋白、球蛋白、免疫蛋白指标及铁和相关酶类的测定采用试剂盒，按照试剂盒说明，使用VITALIB-E全自动生化分析仪测定，球蛋白为白蛋白差值计算获得。
1.4 水貂脏器指数测定上述各组中8只水貂经心采血后立即处死，取皮后迅速取出心、肝、脾和肾，用滤纸吸干脏器表面的血液后进行称重记录，然后计算各脏器指数：脏器指数=器官重量÷体重×100%。
1.5 统计分析方法数据采用SAS9.2软件中的GLM程序进行方差分析，平均数之间的多重比较采用Duncan氏法进行，P＜0.05为差异显著，P＞0.05为差异不显著，数据均用“平均值±标准差”表示。
2 结果 2.1 饲粮铁水平对水貂生产性能的影响由表 2可以看出，Fe300组水貂体重和体长均最高，显著高于Fe0和Fe100组(P＜0.05)，但与Fe200和Fe400组差异不显著(P＞0.05)，水貂毛皮品质各组间差异不显著(P＞0.05)。
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表 2 饲粮铁水平对水貂生产性能的影响 Table 2 Effect of dietary iron levels on growth performance of mink |
如表 3所示，Fe300水貂血清中ALB和GLOB均最高，ALB水平Fe300组显著高于Fe0、Fe200和Fe400组(P＜0.05)，GLOB水平Fe300组显著高于其他各组(P＜0.05)；Fe300组TP显著高于Fe0、Fe100和Fe200组(P＜0.05)，但与Fe400组差异不显著。SUN在Fe300组水貂血清中含量最高，显著高于Fe0、Fe100和Fe200组(P＜0.05)，与Fe400组差异不显著(P＞0.05)。
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表 3 饲粮铁水平对水貂血清中蛋白质代谢相关指标的影响 Table 3 Effect of dietary iron levels on proteins indices in serum of mink |
从表 4可以看出，水貂血清中IgG的水平各组间差异不显著(P＞0.05)，但最高值出现在Fe300组。Fe300组IgA含量显著高于Fe0和Fe200组(P＜0.05)，与Fe100和Fe400组差异不显著(P＞0.05)，IgM各组间差异不显著(P＞0.05)。
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表 4 饲粮铁水平对水貂血清中相关免疫指标的影响 Table 4 Effect of dietary iron levels on immune related indicators in serum of mink |
由表 5可以看出，水貂血清中铁的含量随着日粮铁水平的提高呈显著的升高(P＜0.05)，Fe400组最高，显著高于Fe0和Fe100组(P＜0.05)。Fe400组中ALT最高，显著高于Fe100、Fe200和Fe300组(P＜0.05)，日粮铁水平对水貂血清中AST、LDH、ALP影响不显著(P＞0.05)，但ALP、AST和LDH最高组均为Fe400组。
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表 5 饲粮铁水平对水貂血清中铁及相关酶的影响 Table 5 Effect of dietary iron levels on iron levels and enzymes activity in serum of mink |
如表 6所示，Fe300组水貂心脏指数显著高于Fe0和Fe100(P＜0.05)，与Fe200和Fe400组差异不显著(P＞0.05)。Fe300组水貂肝脏指数显著高于Fe0、Fe100和Fe400组(P＜0.05)，与Fe200组差异不显著(P＞0.05)。水貂脾脏指数和肾脏指数各组间差异不显著(P＞0.05)，但最高值均出现在Fe300组。
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表 6 饲粮铁水平对水貂脏器指数的影响 Table 6 Effect of dietary iron levels on organ index of mink |
铁是动物必需的微量元素之一，饲粮中的铁能够保证动物正常的生长发育与代谢。NRC(1982) 建议水貂饲粮中铁的含量为90 mg·kg-1，这是满足水貂生产的最低需要量，目前较少报道发挥水貂最佳生产性能的饲粮铁水平。衡量水貂皮张价值的两个重要因素就是尺码和品质，而水貂打皮时的体重和体长与皮张的尺码显著相关[11-12]，一般水貂体重和体长越大，水貂皮张的尺码就越大。张彬等[13]报道，仔猪日粮中添加含量为146 mg·kg-1的柠檬酸亚铁，能够显著提高仔猪日增重。林映才等[14]研究表明，无论是来自FeSO4还是富力铁源，当饲粮中铁的含量由165 mg·kg-1提高到247.5 mg·kg-1时小猪的日增重和体重都有提高的趋势。本研究表明，当水貂饲粮中补充300 mg·kg-1的铁时，水貂的体重显著增加，这与前人在猪上的报道结论相一致。不同饲粮铁水平对水貂毛皮品质影响不显著，可能饲粮中铁对水貂的影响主要在体重和皮张上。F.M.Stout等[15]采用放射性的Fe-59对水貂进行试验，研究表明，铁与水貂毛皮中黑色素细胞具有相关性，说明铁可能影响黑色水貂的毛色，但本试验中铁对毛色的影响不明显，可能与试验用铁的剂量不同有关。
3.2 饲粮铁水平对水貂血清中蛋白质代谢相关指标的影响血清中蛋白质代谢相关指标，如总蛋白、球蛋白、白蛋白和血清尿素氮等直接反映动物对饲粮中蛋白质的利用程度。在本试验条件下，当饲粮中补充300 mg·kg-1铁时，水貂血清中ALB、TP和GLOB的水平均最高，在同等饲粮组成的情况下，说明该饲粮铁水平下蛋白质的利用率相对较高。刘庆华等[6]采用给猪注射铁的方法在猪上的研究表明，铁过量组血清中的TP和GLOB含量与对照组相比均显著升高，而缺铁组中TP与GLOB的含量显著或极显著降低，说明随着饲粮铁水平的升高能够促进TP和GLOB的含量，这与本试验结果相一致。但本试验中，当饲粮铁添加量到400 mg·kg-1时，蛋白质代谢相关指标有所降低，可能是由于饲粮铁供给量过高引起了动物机体不适，从而导致蛋白质利用率降低，但饲养试验过程中，各组水貂并未表现出明显的不良反应，其原因有待于进一步研究。SUN是蛋白质和氨基酸的代谢终产物，研究表明，动物体内SUN的浓度很大程度上受日粮中蛋白质和氨基酸数量和质量的影响[16]。本试验中，各组饲粮组成相同，SUN水平最高组为Fe300组，可能是由于水貂机体为适应这一变化，通过改变机体一些酶的活性来改变机体含氮物质的代谢，从而改变日粮蛋白质的利用效率。
3.3 饲粮铁水平对水貂血清中相关免疫指标的影响体液免疫是动物特异性免疫的一个重要方面，无论是抗体对病原体和毒素的中和作用，还是免疫调理吞噬作用以及抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用，都与免疫球蛋白水平和抗体的效价有密切关系。因此，铁对免疫球蛋白水平的影响，直接反映铁与体液免疫功能的关系。关于铁与体液免疫，目前在哺乳动物上的报道较多，但因动物免疫系统的差异，结论也是大相径庭。A.Dhur等[17]和A.R.Sherman[18]研究表明，缺铁儿童B细胞比例、数量及血清免疫球蛋白含量升高，而刘铁纯等[19]报道，缺铁也会降低血清中免疫球蛋白水平。陈凤芹等[8]研究表明，饲粮补充同等剂量的铁时，甘氨酸亚铁能够提高仔猪血清中IgG的含量。安清聪等[20]研究表明，250 mg·kg-1乳铁蛋白能够显著提高仔猪血清中IgG含量。罗玲等[21]研究表明，饲粮中添加120 mg·kg-1的铁时，能够提高鸡血清中IgM的含量。本试验中，当日粮中添加300 mg·kg-1的铁时，能够显著提高水貂血清中IgA和IgM的含量，说明此铁水平下的日粮能够提高水貂体液免疫水平。
3.4 饲粮铁水平对水貂血清中铁及相关酶的影响血清铁反映体内铁的贮存量和机体营养状况，它是检测缺铁和铁负荷过量的有效指标，动物进食铁能够提高血清中铁的含量，所以大量试验通过给动物注射铁制剂，来研究铁水平对动物机体的影响，研究表明，给动物注射铁制剂，能够显著提高动物血清中铁的含量[22-23]。本试验中，随着饲粮铁水平的提高，血清中铁的含量也呈显著的上升趋势，说明铁的贮存量增加，这与前人的研究结果相一致，但也有试验表明，饲粮中添加不同水平的铁对2月龄新西兰兔血清中铁的含量影响不显著[4]，可能是由于动物品种及生长时期或饲粮铁的添加量不同所致。文献报道，在铁代谢和血清肝生化指标检测方面，随着铁摄入量的增加，血清ALT、AST水平明显升高[24]，本试验得到了相同的结论，本研究结果中，LDH和ALP各组间差异不显著，说明铁元素未通过LDH和ALP对肝功能产生影响。
3.5 饲粮铁水平对水貂脏器指数的影响脏器指数是评价脏器中物质毒性常用的指标，其与物质的毒性程度呈一定的相关性，并且器官的大小在一定程度上能够反映出动物机体内器官功能的强弱以及受损情况。大量研究表明，饲粮铁水平对动物脏器系数有一定的影响[8, 25-26]。本试验结果显示，饲粮中的铁水平对肝脏指数有显著影响，但对脾脏指数和肾脏指数无显著影响，300 mg·kg-1组水貂各脏器指数均较高，结合血清中蛋白质代谢及免疫指标，可以得出，当饲粮补充300 mg·kg-1的铁时，有利于增强水貂各脏器的功能，由于饲养和屠宰试验观察饲粮铁水平并未对水貂产生异常影响，结合本试验中铁代谢和血清肝生化指标检测，得出饲粮铁可能通过肝来调节其在动物体内的代谢，具体机理还有待进一步研究。
4 结论本试验条件下，结合水貂生产性能指标、血清中蛋白质代谢相关指标、血清中体液免疫指标、血清铁浓度、相关酶活性及脏器指数指标结果得出，当冬毛期水貂饲粮中添加300 mg·kg-1铁，饲粮中总铁含量为401 mg·kg-1时，能够提高水貂生产性能，同时能够促进蛋白质代谢和提高水貂体液免疫水平，降低了铁对水貂脏器的不利影响以及毒害作用。
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