2. 中国农业大学动物医学院，北京 100193
2. College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China
近年来，随着畜禽养殖业向规模化和集约化方向迅速发展，细菌耐药性、药物残留和环境污染等食品安全及公共卫生问题日趋严重[1]。在畜禽养殖过程中，研究开发一种不含抗生素的绿色饲料添加产品已经成为当前畜禽养殖业和饲料生产企业关注的热点。
中草药是我国独特的医药资源，其以毒性低、副作用小、多靶点、不易产生耐药性的优点逐渐引起人们重视[2]，尤其是具有免疫调节作用的中草药更是成为畜牧业研究的热点，越来越多的单一中草药或复方中草药制剂被用于畜禽养殖生产中。田树海等[3]研究报道，日粮中添加1.0%由黄芪、当归等组成复方中草药添加剂可明显提高育肥猪的平均日增重，降低腹泻率和死亡率，提高血清总蛋白、IgG和IgM的含量。李亮等[4]研究发现，日粮中添加0.5%由黄芪、淫羊藿等组成的复方中草药添加剂不仅显著增加肉鸡脾质量及器官指数，而且还显著升高血清NDV抗体水平，进而促进免疫器官发育。S. Marcinčák等和L. Wang等[5-6]研究显示，日粮中添加牛至提取物可明显改善肉鸡的肌肉品质，而添加连翘提取物还可提高热应激肉鸡的生产性能和抗氧化功能。以上研究充分表明，日粮中添加中草药能够提高畜禽生长性能，改善血清生化指标和肌肉品质，增强机体免疫功能，是养殖业中抗生素的理想绿色饲料替代产品。然而，我国中草药种类较多，不同中草药或中草药复方制剂对畜禽生理功能产生的影响差异较大，且不同中草药加工方式和添加剂量也可直接影响作用效果。因此，本试验根据中兽医基本理论，按照中药组方原则，选配出具有“清热解毒、补中益气、扶正固本”的复方中草药制剂，经过粉碎加工，研究其对肉鸡免疫器官发育和免疫功能的影响，旨在为新型复方中草药制剂的研发及其在畜禽生产中的应用提供参考。
1 材料与方法 1.1 试验动物与饲养管理健康1日龄AA(爱拔益加)肉鸡1 000羽，购自安徽万嘉禽业科技发展有限公司。饲养试验在安徽省定远县某肉鸡养殖场进行，所有肉鸡均饲养在人工控制的环境中，采用网上平养，前3 d温度控制在(33±1) ℃，以后每周平均降低3 ℃，直至24 ℃，并保持此温度到42日龄，环境湿度维持在65%左右，给予24 h光照制度，自由采食和饮水。日常管理与免疫接种按常规程序进行。
1.2 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂及主要成分试验所用复方中草药制剂主要由黄芪、枸杞、金银花、当归、熟地、甘草、淫羊藿和女贞子组成，所有中草药均购自安徽省亳州市中药材市场。中草药去除杂质后用中药粉碎机充分粉碎后过80目筛，然后按比例混合，装袋密封备用。
混合后的复方中草药制剂送至青岛科标检测研究院进行主要成分含量检测。经检测，试验所用复方中草药制剂中：总多糖3.40%，总皂苷0.563%，总黄酮0.101%，甘草苷28.37 mg·kg-1，红景天苷6.28 mg·kg-1，苹果酸1 205.58 mg·kg-1，草酸536.92 mg·kg-1，酒石酸15 384.86 mg·kg-1。
1.3 试验设计试验采用单因素随机试验设计，1 000羽1日龄AA肉鸡随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组，每组5个重复，每个重复50羽，对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%和1.5%的黄芪、枸杞、金银花等中草药复方制剂，试验期42 d。
1.4 基础日粮基础日粮是根据NRC(1994) 推荐的肉仔鸡营养需要配制的玉米-豆粕型基础日粮，基础日粮组成及营养水平见表 1。
|
表 1 基础日粮组成及营养水平 Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet |
分别于试验第21和42天从每个处理组随机抽取15羽(每个重复3羽)，共60羽肉鸡，禁食12 h，称重后采用分离胶真空促凝分离采血管[Sekisui Medical (China) Co., Ltd]从翅下静脉采血5 mL用于分离血清。颈动脉放血致死，迅速解剖采取胸腺、脾、法氏囊，分析天平称重，固定于4%多聚甲醛磷酸缓冲液(pH7.4)。血液样品室温静置2 h后，于4 ℃条件下3 000 r·min-1离心15 min，分离血清，－70 ℃保存待用。
1.6 免疫器官质量和指数测定胸腺、脾和法氏囊等免疫器官被分离后，迅速吸干器官表面水分，剥离脂肪和无关组织，采用万分之一电子分析天平(ME-T，瑞士Mettler-Toledo公司)称重，记录免疫器官质量，并计算免疫器官指数，器官指数＝(器官质量/屠体重)×100%。
1.7 石蜡切片与HE染色肉鸡胸腺、脾、法氏囊等免疫器官固定好后，经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，石蜡轮转切片机(RM2235，Leica仪器有限公司，德国)连续横向切片，厚6 μm，每隔30张取2张切片用于HE染色，二甲苯透明，中性树胶封片。每羽肉鸡每个免疫器官分别取20张切片，用麦克奥迪BA410正置显微摄影系统(麦克奥迪厦门医疗诊断系统有限公司)观察，然后每张切片均匀选取5个视野在4×或20×物镜下拍照，显微图像分析软件(Image-Pro Plus 6.0)测量每个视野内不同免疫器官的组织学参数。
1.8 血清免疫球蛋白含量测定肉鸡血清经室温融化后，采用全自动血清生化分析仪(ZY-360，上海科华生物工程股份有限公司)测量血清IgA、IgM、IgG含量。
1.9 血清抗体水平和细胞因子含量测定肉鸡血清经室温融化后，采用ELISA检测试剂盒(美国R&D Systems Inc)测定肉鸡血清NDV水平及IL-2、IL-4和INF-γ含量。操作步骤按试剂盒说明书进行，全波长酶标仪(Multiskan GO，Thermo Fisher Scientific, USA)测定吸光度。
1.10 数据统计试验数据采用SPSS20.0软件进行统计分析，各组数据之间差异性采用单因子方差(One-Way ANOVA)分析中的LSD法进行多重比较分析，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。所有数据均用“平均数±标准差(x±s)”表示。
2 结果 2.1 免疫器官质量及指数黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官质量的影响见表 2。由表 2可见，21日龄时，试验Ⅲ组脾质量较对照组升高38.20%(P＜0.05)，较试验Ⅰ、Ⅱ组分别升高45.10%和42.47%(P＜0.05)。42日龄时，与对照组相比较，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组胸腺质量分别升高42.68%、39.17%和36.96%(P＜0.05)，试验Ⅲ组脾质量升高28.53%(P＜0.05)，试验Ⅰ、Ⅱ组法氏囊质量分别升高28.02%和26.61%(P＜0.05)。以上结果表明，饲料中添加适量黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂可不同程度促进免疫器官生长。
|
|
表 2 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官质量的影响(x±s) Table 2 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on immune organ weight of broilers (x±s) |
黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官指数的影响见表 3。由表 3可见，21日龄时，试验Ⅱ组法氏囊指数和试验Ⅲ组脾指数较对照组分别升高107.03%和17.67%(P＜0.05)。42日龄时，与对照组相比较，试验Ⅱ组胸腺和法氏囊指数分别升高47.08%和57.65%(P＜0.05)，试验Ⅲ组胸腺指数和试验Ⅰ组法氏囊指数分别升高42.37%和60.32%(P＜0.05)，试验Ⅰ~Ⅲ组脾指数无显著变化(P＞0.05)。结果显示，日粮中添加黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡生长后期免疫器官发育的促进作用较为明显。
|
|
表 3 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官指数的影响(x±s) Table 3 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on immune organ indexes of broilers (x±s) |
黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官组织结构的影响见图 1、2。由图 1可见，21日龄时，对照组脾组织结构正常，白髓动脉周围淋巴鞘和脾小结较小，脾小结生发中心不明显，红髓脾窦较宽(图 1A)；胸腺小叶皮质较厚，髓质可见少量胸腺小体(图 1B)；法氏囊小叶内法氏囊小结数量较多，结构正常，小结皮质和髓质分界明显，皮质较厚(图 1C)。试验Ⅰ、Ⅱ组脾和胸腺组织结构变化不大，脾红髓脾窦较窄，白髓脾小结数量较多，动脉周围淋巴鞘较厚(图 1D、G)；胸腺小叶皮质较薄，部分髓质内胸腺小体数量增加，小叶间结缔组织较少(图 1E、H)。试验Ⅲ组脾组织结构变化明显，白髓脾小结较大，数量较多，动脉周围淋巴鞘明显较厚，淋巴细胞排列紧密，红髓脾窦变窄，脾索较粗(图 1J)，胸腺组织结构无明显变化，仅见部分胸腺小叶皮质较厚，髓质内胸腺小体较少(图 1K)。试验Ⅱ组法氏囊小叶明显较大，法氏囊小结数量较多，面积明显较大，小结皮质和髓质分界较明显，皮质较厚(图 1I)，试验Ⅰ、Ⅲ组法氏囊组织结构变化不明显，仅见小叶内法氏囊小结数量有所增多(图 1F、L)。
|
A~C.对照组；D~F.试验Ⅰ组；G~I.试验Ⅱ组；J~L：试验Ⅲ组；A、D、G、J.脾，比例尺＝50 μm；B、E、H、K.胸腺，比例尺＝100 μm；C、F、I、L.法氏囊，比例尺＝300 μm；▲.脾动脉周围淋巴鞘；★.脾小结 A-C. Control group; D-F. Experimental groupⅠ; G-I. Experimental groupⅡ; J-L. Experimental groupⅢ; A, D, G, J. Spleen, bar＝50 μm; B, E, H, K. Thymus, bar＝100 μm; C, F, I, L. Bursa of Fabricius, bar＝300 μm; ▲. Periarterial lymphatic sheath; ★. Splenic node 图 1 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对21 d肉鸡免疫器官组织结构的影响 Figure 1 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on immune organ microstructure of 21-day-old broilers |
图 2显示，42日龄时，对照组肉鸡免疫器官组织结构正常(图 2A、B、C)。试验Ⅱ、Ⅲ组胸腺结构变化明显，胸腺小叶面积较大，皮质明显较厚，髓质内淋巴细胞较多，胸腺小体明显较少(图 2H、K)，试验Ⅰ组胸腺组织结构无明显变化，部分胸腺小叶皮质较厚(图 2E)；试验Ⅲ组脾结构变化明显，白髓脾小结数量明显较多、体积较大，动脉周围淋巴鞘明显较厚，红髓脾窦较宽(图 2J)，试验ⅠⅡ组脾组织结构变化不明显，仅见试验Ⅰ组脾小结较大(图 2D、G)；试验Ⅰ、Ⅱ组法氏囊结构变化明显，法氏囊小结明显较大，试验Ⅱ组法氏囊小结内淋巴细胞密集，皮质明显较厚(图 2F、I)，试验Ⅲ组法氏囊组织结构无明显变化(图 2L)。
|
A~C.对照组；D~F.试验Ⅰ组；G~I.试验Ⅱ组；J~L：试验Ⅲ组；A、D、G、J.脾，比例尺=50 μm；B、E、H、K.胸腺，比例尺=100 μm；C、F、I、L.法氏囊，比例尺=300 μm；▲.脾动脉周围淋巴鞘；★.脾小结 A-C. Control group; D-F. Experimental groupⅠ; G-I. Experimental groupⅡ; J-L. Experimental groupⅢ; A, D, G, J. Spleen, bar=50 μm; B, E, H, K. Thymus, bar=100 μm; C, F, I, L. Bursa of Fabricius, bar=300 μm; ▲. Periarterial lymphatic sheath; ★. Splenic node 图 2 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对42 d肉鸡免疫器官组织结构的影响 Figure 2 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on immune organ microstructure of 42-day-old broilers |
肉鸡免疫器官组织学参数测量结果见表 4。表 4显示，21日龄时，试验Ⅲ组脾动脉周围淋巴鞘面积较对照组和试验Ⅰ、Ⅱ组分别升高64.40%、55.35%和61.41%(P＜0.05)，脾小结面积较试验Ⅰ、Ⅱ组分别升高20.65%和28.82%(P＜0.05)；试验Ⅱ组法氏囊小结面积较对照组升高12.51%(P＜0.05)。42日龄时，试验Ⅱ、Ⅲ组胸腺皮质厚度较对照组和试验Ⅰ组分别升高27.47%、29.92%和20.92%、23.24%(P＜0.05)；试验Ⅰ、Ⅲ组脾小结面积较对照组升高17.16%和19.54%(P＜0.05)，
|
|
表 4 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官组织学参数的影响(x±s) Table 4 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on the histological parameters of immune organs in broilers (x±s) |
试验Ⅲ组动脉周围淋巴鞘面积较对照组和试验Ⅰ、Ⅱ组分别升高53.37%、34.28%和46.75%(P＜0.05)；试验Ⅰ、Ⅱ组法氏囊小结面积较对照组和试验Ⅲ组分别升高14.95%、31.66%和26.91%、45.36%(P＜0.05)。结果表明，日粮添加适量的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官的组织结构有较为明显的改善作用。
2.4 血清免疫球蛋白含量肉鸡血清免疫球蛋白含量变化见表 5。由表 5可见，21日龄时，与对照组相比较，试验Ⅰ、Ⅱ组血清IgG含量分别升高26.45%和37.68%(P＜0.05)，试验Ⅱ组血清IgM含量升高43.23%(P＜0.05)，各处理组血清IgA含量相比均无显著差异(P＞0.05)。42日龄时，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清IgG含量较对照组分别升高27.13%、31.78%和30.62%(P＜0.05)，血清IgM含量也分别升高63.55%、68.50%和67.15%(P＜0.05)，各处理组血清IgA含量相比无显著差异(P＞0.05)。结果表明，日粮中添加适量黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡血清免疫球蛋白合成有明显促进作用，其中以添加1.0%复方中草药制剂的促进作用最为显著。
|
|
表 5 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响(x±s) Table 5 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on serum immunoglobulin levels of broilers (x±s) |
NDV抗体测定标准曲线相关系数为0.998 1。肉鸡血清NDV抗体水平结果见表 6。由表 6可见，21日龄时，试验Ⅰ、Ⅱ组血清NDV抗体水平较对照组和试验Ⅲ组分别升高64.35%、75.39%和41.25%、50.73%(P＜0.05)。42日龄时，试验Ⅰ、Ⅱ组血清NDV抗体水平较对照组和试验Ⅲ组分别升高40.67%、38.93%和18.54%、17.08%(P＜0.05)，试验Ⅲ组较对照组升高18.67%(P＜0.05)。结果表明，日粮中添加复方中草药制剂能够促进血清NDV抗体的产生，此结果与肉鸡血清免疫球蛋白含量及免疫器官组织结构变化基本一致。
|
|
表 6 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡血清NDV抗体水平的影响(x±s) Table 6 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on serum NDV antibody levels of broilers (x±s) |
IL-2、IL-4和INF-γ测定标准曲线相关系数分别为0.999 4、0.999 2、0.995 3。肉鸡血清细胞因子水平结果见表 7。由表 7可见，21日龄时，与对照组相比较，试验Ⅲ组血清IL-2和INF-γ水平分别升高111.35%和99.42%(P＜0.05)；试验Ⅱ组血清IL-4水平升高40.77%(P＜0.05)。42日龄时，试验Ⅱ、Ⅲ组血清IL-4和INF-γ水平较对照组分别升高78.33%、112.77%和46.39%、160.92%(P＜0.05)；试验Ⅲ组血清IL-2水平较对照组升高23.26%，但差异不显著(P＞0.05)，试验Ⅰ组血清IL-2、IL-4和INF-γ水平与对照组相比均无统计学意义(P＞0.05)。结果表明，日粮添加适量复方中草药制剂可促进肉鸡血清IL-4、IL-2和INF-γ等细胞因子的分泌。
|
|
表 7 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡血清细胞因子水平的影响(x±s) Table 7 The effect of compound Chinese herbal medicine preparation of Astragalus, Wolfberry and Honeysuckle flower on serum cytokine levels of broilers (x±s) |
胸腺的主要功能是产生和培育T淋巴细胞，参与机体的细胞免疫功能。法氏囊的主要功能是产生和培育特异性的B淋巴细胞，参与机体的体液免疫功能。脾是免疫应答的场所，是机体对抗病原入侵而产生体液免疫反应和细胞免疫反应的主要部位[7]，胸腺、法氏囊和脾的生长发育状况对禽类机体的免疫功能状态可产生极其重要的直接影响，而三种免疫器官的生长发育状况可通过质量与器官指数来反映[8]。一般认为，免疫器官质量和指数增加是由于其器官自身的细胞生长发育和分裂增殖所致，是机体免疫增强的表现，而免疫器官质量和指数的降低为免疫抑制所致, 是机体免疫状况变差的表现。许多研究发现，适量的添加中草药对动物机体免疫器官生长发育可产生促进作用。苏记良等[9]研究发现，日粮中添加0.5%的由黄芪、黄柏等组成的复方中草药组方能显著增加黄羽肉鸡胸腺和法氏囊指数，并提高血清IgG的含量。俞景林[10]研究报道，日粮中添加0.2%的由苦参、肉桂组成的复方中草药添加剂可显著增加蛋雏鸡胸腺和法氏囊器官指数。赵红梅等[11]研究显示，日粮中添加1.0%的超微粉碎中草药添加剂可显著增加断奶仔猪脾和胸腺器官指数。本研究也发现，日粮中添加1.0%的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂可显著增加21 d肉鸡法氏囊指数和42 d肉鸡脾指数以及42 d肉鸡胸腺和法氏囊质量与器官指数，而添加1.5%的复方中草药制剂可显著增加21、42 d肉鸡脾质量和器官指数，这表明日粮中适量添加1.0%和1.5%的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂能明显促进肉鸡中枢和外周免疫器官生长发育。其原因主要是由于免疫器官的生长发育需要大量的营养物质，而本研究所用的复方中草药制剂中所含的主要成分能够促进动物小肠结构发育，提高肠道消化酶活性和消化能力，进而为免疫器官生长发育提供充足的必需营养物质[12]。
3.2 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫器官组织结构的影响器官的组织结构是评价器官发育状况的又一重要指标，不同年龄段的器官中，执行功能的组织结构变化可以直接反映该器官的发育状况和功能情况。本研究发现，日粮中添加1.0%的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂能明显改善肉鸡胸腺和法氏囊的组织结构，使42 d肉鸡胸腺小叶面积增大，皮质显著增厚，髓质内淋巴细胞增多，胸腺小体明显较少；使21、42 d肉鸡法氏囊小结面积增大，小结内淋巴细胞排列更加密集，小结皮质明显增厚，这表明添加1.0%的复方中草药制剂能够促进肉鸡生长后期胸腺的生长发育，增加胸腺培育T淋巴细胞的能力，进而增强机体细胞免疫功能，这与甘辉群等的研究结果相似[13]。同时，添加1.0%的复方中草药制剂还能明显促进肉鸡整个生长期法氏囊的生长发育，进而增强机体体液免疫功能，这与王福传等和李艳华等对黄芪、金银花的研究结果相似[14-15]，暗示添加一定剂量的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂可增强肉鸡中枢免疫器官的功能。
另外，本研究还发现，日粮中添加1.5%的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂可以明显改善21、42 d肉鸡脾的组织结构，使白髓内脾小结和中央动脉数量增多，动脉周围淋巴鞘和脾小结面积显著增大，红髓脾索增粗，这表明添加1.5%复方中草药制剂能够明显促进肉鸡脾的生长发育，增强脾免疫应答的功能，这可能是本研究所用的复方中草药制剂中所含黄芪、枸杞、甘草等成分能够改善肠道菌群平衡，促进营养物质的吸收，有利于脾的生长发育[16-18]。因为，脾产生免疫应答的部位主要是在动脉周围淋巴鞘、脾小结和边缘区，其中脾动脉周围淋巴鞘和脾小结中的淋巴细胞主要以T和B淋巴细胞为主，脾动脉周围淋巴鞘和脾小结面积的大小可以反映T和B淋巴细胞数量，进而表明脾发育及其免疫功能情况[19]。因此，适量添加黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂可通过促进中枢和外周免疫器官的生长发育，改善免疫器官的组织结构，进而增强肉鸡的免疫功能，提高抗病能力。
3.3 黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂对肉鸡免疫功能的影响动物机体的特异性免疫反应包括体液免疫和细胞免疫，体液免疫主要由B淋巴细胞产生特异性抗体来介导，细胞免疫主要由T淋巴细胞及其分泌的细胞因子来介导。T淋巴细胞根据功能不同，可分为CD4、CD8、效应和记忆性T细胞等[20]。其中，CD4+T细胞根据分泌细胞因子的类型不同又分为Th1和Th2亚型，Th1型细胞主要分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子，能够辅助抗体产生，参与细胞免疫和迟发型超敏性炎症反应。Th2型细胞主要分泌IL-4、IL-6等细胞因子，能够刺激B淋巴细胞增殖并分泌抗体，参与体液免疫[21]。因此，通过检测血清中免疫球蛋白含量、特异性抗体以及Th1和Th2型细胞因子的水平可以直接反映动物机体的体液免疫和细胞免疫功能状态。
研究已经证实，许多中草药及其提取物对动物机体免疫功能可产生明显的调节作用。J. J. Cheng等[22]研究显示，肉鸡饲喂适量的黄芪麻杏石甘汤，可显著增加传染性支气管炎病毒感染后脾IFN-γ和支气管黏膜sIgA的水平，增强机体细胞免疫和黏膜免疫功能。Z. H. Ren等[23]研究报道，饲喂适量的枸杞乳可明显增加流感病毒感染小鼠肺中IL-2水平，减轻肺的组织病理变化。M. Katayama等[24]研究表明，日粮中添加0.15%的甘草，可显著增加生长育肥猪外周血CD4+T细胞比例以及唾液IgA和血清IL-2含量，提高机体免疫力。杨润霞等[25]研究发现，日粮中添加“扶正止泻散”复方中草药制剂可显著增加雏鸡血液中T淋巴细胞ANAE阳性细胞率、B淋巴细胞数以及血清NDV抗体效价和IFN-γ水平，进而增强细胞和体液免疫功能。本研究也发现，日粮中添加1.0%黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂可明显增加21、42 d肉鸡血清IgG和IgM含量以及NDV抗体和IL-4的水平，这表明1.0%的复方中草药制剂可明显促进肉鸡免疫球蛋白、NDV抗体和IL-4的合成，进而增强机体的体液免疫功能。日粮中添加1.5%的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂能明显增加42 d肉鸡血清IgG和IgM含量以及IL-2和IFN-γ水平，表明1.5%复方中草药制剂可明显促进肉鸡生长后期免疫球蛋白和细胞因子的分泌，进而增强机体非特异性免疫功能和细胞免疫功能。
综合分析以上结果，笔者认为，日粮中添加1.0%和1.5%的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂能够明显增加不同生长阶段肉鸡法氏囊、胸腺和脾的质量与器官指数，改善组织结构，促进免疫器官的发育，进而提高血清免疫球蛋白、NDV抗体和T细胞因子水平，从而增强机体体液和细胞免疫功能。那么，黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂是通过何种途径影响机体免疫功能呢？分析其主要原因：(1)金银花、黄芪等中草药能够提高动物机体抗氧化酶活性，降低MDA含量，增强机体抗氧化功能，进而保护免疫细胞对抗氧自由基损伤[26]，进而促进免疫器官的发育。(2)复方中草药制剂所含的多糖、皂苷等成分能够抑制细胞凋亡蛋白的表达，促进抗凋亡蛋白基因的转录，阻止体内外因素诱导的细胞凋亡，进而促进细胞的增殖和分化[27-28]，增强了免疫细胞自身的功能。
4 结论日粮中添加不同剂量的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂可在不同程度上促进肉鸡免疫器官发育，改善组织结构，提高血清免疫球蛋白、NDV抗体和细胞因子水平，进而增强机体免疫功能。其中，以日粮中添加1.0%的黄芪、枸杞、金银花等复方中草药制剂的效果更为明显。
| [1] |
陈张华, 邓惠丹, 邓俊良, 等. 复方中草药"猪康散"对仔猪生产性能及细胞免疫功能的影响[J]. 中国兽医学报, 2012, 32(6): 898–901.
CHEN Z H, DENG H D, DENG J L, et al. Effect of Zhukangsan on growth performance and cellular immune function of in piglets[J]. Chinese Journal of Veterinary Science, 2012, 32(6): 898–901. (in Chinese) |
| [2] |
王福传, 方昌阁, 张玉换, 等. 复方中草药免疫增强剂对蛋鸡免疫效果的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2006, 37(2): 187–192.
WANG F C, FANG C G, ZHANG Y H, et al. Effects of compound Chinese herbal immune synergist on immunity of egg-laying chicken[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2006, 37(2): 187–192. (in Chinese) |
| [3] |
田树海, 曹洪战, 范苗, 等. 复方中草药添加剂对育肥猪生产性能和血液指标的影响[J]. 畜牧与兽医, 2010, 42(2): 37–40.
TIAN S H, CAO H Z, FAN M, et al. Effect of compound Chinese herbal medicine additive on performance and blood index of finishing pigs[J]. Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2010, 42(2): 37–40. (in Chinese) |
| [4] |
李亮, 龚道清, 张军, 等. 复方中草药饲料添加剂对黄羽肉鸡免疫性能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2008, 35(1): 26–28.
LI L, GONG D Q, ZHANG J, et al. Effect of Chinese herb medicine feed additive on immune performance of Chinese yellow-feathered chicken[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2008, 35(1): 26–28. (in Chinese) |
| [5] | MARCINČÁK S, CABADAJ R, POPELKA P, et al. Antioxidative effect of oregano supplemented to broilers on oxidative stability of poultry meat[J]. Slov Vet Res, 2008, 45(2): 61–66. |
| [6] | WANG L, PIAO X L, KIM S W, et al. Effects of Forsythia suspensa extract on growth performance, nutrient digestibility, and antioxidant activities in broiler chickens under high ambient temperature[J]. Poul Sci, 2008, 87(7): 1287–1294. DOI: 10.3382/ps.2008-00023 |
| [7] |
阴天榜, 刘兴友.
家禽免疫学[M]. 北京: 中国农业科技出版社, 1999: 194-201.
YIN T B, LIU X Y. Poultry immunology[M]. Beijing: China Agriculture Scientech Press, 1999: 194-201. (in Chinese) |
| [8] | RIVAS A L, FABRICANT J. Indications of immunodepression in chickens infected with various strains of Marek's disease virus[J]. Avian Dis, 1988, 32(1): 1–8. DOI: 10.2307/1590941 |
| [9] |
苏记良, 梁祖满, 罗秋兰, 等. 复方中草药对黄羽肉鸡生长性能及免疫功能的影响[J]. 饲料研究, 2016(10): 13–16, 27.
SU J L, LIANG Z M, LUO Q L, et al. Effects of compound Chinese herbal medicine on growth performance and immune function of Huang Yu broilers[J]. Feed Research, 2016(10): 13–16, 27. (in Chinese) |
| [10] |
俞景林. 中草药添加剂对蛋雏鸡生长性能及免疫器官指数的影响研究[J]. 浙江畜牧兽医, 2013, 38(5): 3–5.
YU J L. Effects of Chinese herbal medicine additives on growth performance and immune organ index of laying chicks[J]. Zhejiang Journal Animal Science and Veterinary Medicine, 2013, 38(5): 3–5. (in Chinese) |
| [11] |
赵红梅, 梁明振. 超微中草药添加剂对断奶仔猪免疫器官指数影响的研究[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2014(4): 138–139.
ZHAO H M, LIANG M Z. Study on the effect of Chinese herbal medicine additives on immune organ index of weaned piglets[J]. Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine, 2014(4): 138–139. (in Chinese) |
| [12] |
陈国顺, 陈胜, 随亚楠. 中草药饲料添加剂对合作猪肠道消化酶活性和消化能力的影响[J]. 山东农业大学学报:自然科学版, 2014, 45(4): 529–535.
CHEN G S, CHEN S, SUI Y N. Influence of Chinese herbal feed additives on wild pigs' activity of digestive enzyme in intestinal tract and ability to digest[J]. Journal of Shandong Agricultural University: Natural Science Edition, 2014, 45(4): 529–535. (in Chinese) |
| [13] |
甘辉群, 刘明生, 陈光明, 等. 复方黄芪制剂对雏鸡免疫机能的影响[J]. 中国兽药杂志, 2014, 48(12): 27–31.
GAN H Q, LIU M S, CHEN G M, et al. The effects of compound Astragalus preparations on the immunity function in chickens[J]. Chinese Journal of Veterinary Drug, 2014, 48(12): 27–31. (in Chinese) |
| [14] |
王福传, 韩一超, 赵洪恩, 等. 复方中草药免疫增强剂对鸡免疫器官组织形态学影响的研究[J]. 中国预防兽医学报, 2001, 23(6): 419–421.
WANG F C, HAN Y C, ZHAO H E, et al. The effect of compound Chinese herbal on chicken immune organs and tectology[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2001, 23(6): 419–421. (in Chinese) |
| [15] |
李艳华, 闫清波, 于康震, 等. 复方中药对禽流感病毒的防治研究[J]. 中国农业科学, 2008, 41(5): 1511–1518.
LI Y H, YAN Q B, YU K Z, et al. Study of the compound Chinese medicine against the anti-avian influenza virus[J]. Scientia Agricultural Sinica, 2008, 41(5): 1511–1518. (in Chinese) |
| [16] |
高杨, 王洪芳, 陈辉, 等. 饲粮添加黄芪多糖对蛋鸡免疫功能及肠道菌群的影响[J]. 动物营养学报, 2011, 23(3): 447–451.
GAO Y, WANG H F, CHEN H, et al. Effects of dietary Astragalus Polysaccharides on immune function and intestinal flora in laying hens[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2011, 23(3): 447–451. (in Chinese) |
| [17] |
孙晓雨, 崔子寅, 张明亮, 等. 枸杞多糖和茯苓多糖对免疫抑制小鼠免疫增强及对肠道黏膜的免疫调节作用[J]. 中国兽医学报, 2015, 35(3): 450–455.
SUN X Y, CUI Z Y, ZHANG M L, et al. Effect of Lycium barbarum polysaccharides and Pachymaran on immune function and intestinal mucosal system in immunosuppressive mice[J]. Chinese Journal of Veterinary Science, 2015, 35(3): 450–455. (in Chinese) |
| [18] |
程鹏, 白云静, 于晓红, 等. 甘草多糖提取工艺的研究及其对小鼠免疫口蹄疫疫苗后细胞免疫的影响[J]. 北京农学院学报, 2015, 30(3): 30–34.
CHENG P, BAI Y J, YU X H, et al. Extraction process of Glycyrrhiza glabra polysaccharides and its cellular immune responses on the mice after immunization FMD vaccine[J]. Journal of Beijing University of Agriculture, 2015, 30(3): 30–34. (in Chinese) |
| [19] | XIE D, WANG Z, CAO J, et al. Effects of monochromatic light on proliferation response of Splencyte in broilers[J]. Anat Histol Embryol, 2008, 37(5): 332–337. DOI: 10.1111/ahe.2008.37.issue-5 |
| [20] | WINTER H, VAN DEN ENGEL N K, RÜTTINGER D, et al. Therapeutic T cells induce tumor-directed chemotaxis of innate immune cells through tumor-specific secretion of chemokines and stimulation of B16BL6 melanoma to secrete chemokines[J]. J Transl Med, 2007, 5(1): 56. DOI: 10.1186/1479-5876-5-56 |
| [21] | O'GARRA A, MURPHY K. Role of cytokines in determining T-lymphocyte function[J]. Curr Opin Immunol, 1994, 6(3): 458–466. DOI: 10.1016/0952-7915(94)90128-7 |
| [22] | CHENG J J, LI Q Y, SHI W Y, et al. Effects of Huangqi Maxingshigan decoction on infectious laryngotracheitis in chickens[J]. Ital J Anim Sci, 2011, 10(2): 124–130. |
| [23] | REN Z H, NA L X, XU Y M, et al. Dietary supplementation with lacto-wolfberry enhances the immune response and reduces pathogenesis to influenza infection in mice[J]. J Nutr, 2012, 142(8): 1596–1602. DOI: 10.3945/jn.112.159467 |
| [24] | KATAYAMA M, FUKUDA T, OKAMURA T, et al. Effect of dietary addition of seaweed and licorice on the immune performance of pigs[J]. Anim Sci J, 2011, 82(2): 274–281. DOI: 10.1111/asj.2011.82.issue-2 |
| [25] |
杨润霞, 吴润, 刘磊, 等. 三种中药复方制剂对雏鸡免疫器官发育及免疫功能的影响[J]. 甘肃农业大学学报, 2015, 50(4): 28–33.
YANG R X, WU R, LIU L, et al. Effects of three traditional Chinese medicine prescriptions on the immune organ development and immune function of chicken[J]. Journal of Gansu Agricultural University, 2015, 50(4): 28–33. (in Chinese) |
| [26] | CHEN X, LIN H Z, JIANG S G, et al. Dietary supplementation of honeysuckle improves the growth, survival and immunity of Penaeus monodon[J]. Fish Shellfish Immunol, 2013, 35(1): 161–169. DOI: 10.1016/j.fsi.2013.04.020 |
| [27] | LIU C, WANG G Q, CHEN G F, et al. Huangqi decoction inhibits apoptosis and fibrosis, but promotes Kupffer cell activation in dimethylnitrosamine-induced rat liver fibrosis[J]. BMC Complement Altern Med, 2012, 12(1): 51. |
| [28] |
胡永灵, 叶世莉, 罗佳捷. 中草药制剂对热应激奶牛泌乳性能、抗氧化能力及免疫功能的影响[J]. 草业学报, 2015, 24(1): 132–140.
HU Y L, YE S L, LUO J J. Effect of Chinese herbal medicine on milk production, antioxidant capacity and immunity of dairy cows[J]. Acta Prataculturae Sinica, 2015, 24(1): 132–140. DOI: 10.11686/cyxb20150117 (in Chinese) |