银盾革蜱(Dermacentor niveus)是一种重要的吸血性体外寄生虫，隶属节肢动物门(Arthropoda)蛛形纲(Arachnida)蜱螨亚纲(Acari)寄螨总目(Parasitiformes)蜱目(Ixodida)硬蜱科(Ixodidae)革蜱属(Dermacentor)^[1]。该硬蜱主要分布于中国的新疆及西藏地区，国外主要分布于俄罗斯、蒙古和欧洲一些国家。银盾革蜱为我国新疆地区优势种革蜱类，主要分布于准噶尔盆地、准噶尔界山及其山间谷地、塔里木盆地和阿尔泰山区域。

银盾革蜱属于不完全变态发育，其发育过程可分为卵、幼虫、若虫和成虫四个阶段。该硬蜱完成一个生活周期需三个不同宿主，表现为三宿主蜱，相对单一宿主及二宿主蜱，其增加了病原体在宿主动物及媒介蜱各发育期间传递，具有更大危害性^[2]。除卵时期外，处于其余三个不同发育阶段银盾革蜱需要寄生于宿主体表进行持续吸血，吸取血液的同时可将自身携带的病原体传播给宿主，包括细菌(Bacteria)、病毒(virus)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)、立克次体(Rickettsia)等重要病原体，可引起Q热(Q fever)、土拉菌病(Tularemia)、斑点热(spotted fever)、莱姆病(Lyme disease)、新疆出血热(Sinkiang hemorrhagic fever)、无浆体病(anaplasmosis)^[3-8]，随着草地畜牧业的大力发展，增加了放牧家畜、牧民与媒介蜱直接接触的机会，对当地健康养殖、畜牧业发展及人员安全造成了巨大的威胁，因此，生物制剂、化学药物以及多种复方制剂的杀蜱药得到了广泛的应用，同时国内外学者也在尝试通过遗传防治和免疫防治的新方法对蜱类进行控制，其中RNA干扰技术和疫苗研制已取得一定的效果^[9-11]。但是，在不同龄期蜱类的形态结构、生理状态以及药物敏感程度差异明显，通过化学药物、基因工程以及免疫的方法对蜱类的各发育阶段进行全面防治存在一定难度。同时随着近来媒介蜱区系分布的复杂化、已确定种的形态描述不够确切，以及银盾革蜱形态及生物学特性记录较早，亟需更新相关资料。因此，笔者以新疆优势种银盾革蜱为实验材料，借助体视显微镜和扫描电子显微镜，首次对该硬蜱不同发育阶段的形态特征进行了较为详细的观察研究，补充完善银盾革蜱的形态及生物学相关参数，为我国新疆地区蜱及蜱传疾病的系统研究和综合防控奠定基础。

1 材料与方法 1.1 试蜱采集及饲蜱试验

于2016年3－6月，银盾革蜱(省略种属鉴定法)^[12-14]采自新疆阿勒泰区自然放牧的家畜(马、牛、羊)体表，分装入自制产卵管内，放入恒温生化培养箱(温度26 ℃±1 ℃，相对湿度95%±5%，无光周期)，并作好记录。产卵后，待卵孵化，取30~50只幼蜱接种于成年试验兔体表待饱血脱落后，收集到培养管中放入恒温生化培养箱(温度26 ℃±1 ℃，相对湿度75%±5%，无光周期)待幼蜱蜕皮，而后幼蜱蜕变为若蜱、除去未蜕皮的幼蜱，将部分若蜱接种于试验兔，饱血脱落后，待若蜱蜕皮(温度26 ℃±1 ℃，相对湿度95%±5%，无光周期)，收集成蜱^[15]。

1.2 主要仪器

日立(HITACHI)S-570型扫描电子显微镜，JK-DY100型数控超声波清洗器，ALPHA1-2型真空冷冻干燥仪(德国Christ公司)，Motic SMZ-168体视显微镜。

1.3 显微样品处理

选取培养中获得的幼蜱、若蜱、成蜱放入85 ℃左右的水中5 s，通过高温将其处死同时也达到硬蜱肢体伸展效果，高温灭菌蒸馏水对幼蜱、若蜱、成蜱样品进行清洗；虫卵(发育后期)收集后，可直接清洗；超声波再次清洗(80 kHz)，成蜱30 min，卵、幼蜱及若蜱5~10 min，并借助体视显微镜对银盾革蜱各发育阶段进行初步观察。成蜱浸于PBS缓冲液，第1~3基节下方轻刺3个小孔，于2.5%的戊二醛固定液进行固定，而卵、幼蜱和若蜱不需破壁处理可直接放入戊二醛固定液。再经30%、50%、70%、80%、90%、100%和100%乙醇梯度脱水。脱水后，于无水乙醇与丙酮混合液中(1:1)8 min，无水乙醇与丙酮混合液中(1:4)10 min，100%丙酮30 min依次进行置换。将样品放入真空冷冻干燥仪(真空度0.1 mbar，温度－42 ℃)干燥，干燥后将样品用导电胶带粘附于样品台上，进行喷金。最后在扫描电子显微镜下进行观察。

2 结果 2.1 体视显微镜下银盾革蜱各龄期主要形态

在体视显微镜下观察银盾革蜱卵、幼蜱、若蜱和成蜱，雌蜱产卵时，活动极弱，仅肢节偶尔活动，产卵前生殖孔周围附有乳白色黏稠液体，随着产卵的开始逐渐变为黄色。刚产出的虫卵呈浅黄色、半透明、长椭圆形(0.36 mm±0.05 mm，N＝100)，卵堆相互粘连呈葡萄状，(图 1A)。随着孵化时间的增加，虫卵的颜色逐渐加深(图 1H，5~10 d)，卵一端逐渐形成点状乳白色结构，边界模糊，似波浪状，继之卵由深再次变浅，稍透明，点状乳白色结构边界明显，且有数根明显线条向另一端延伸(图 1I，15~23 d)；破壳前体视镜下，可见卵内幼蜱，卵从一侧形成弧状开口，刚孵化的幼蜱缓慢倒退爬出，依附卵壳外，稍息停留后，快速活动。幼蜱(0.39 mm±0.05 mm，N＝70) 躯体上半部为淡黄色，下半部为半透明状，且可见内部花瓣状肠道结构，肢节3对，无生殖孔，肛门处可见白色圆点状结构与虫卵期最早形成的点状乳白色结构相对应(图 1B、E)，饱血后体积极度膨胀，呈乳白色，体内可见褐色花瓣形肠道约占背部2/3(图 1C、F)。若蜱(1.19 mm±0.20 mm，N＝70) 躯体呈黄褐色，肢节4对，假头基为三角形，有气门板但无生殖孔(图 1D、G)。雄性成蜱(未饱血体长3.50 mm±2.00 mm，N＝50) 假头基为矩形，且基突明显，盾板覆盖整个背部，其表面珐琅彩鲜艳；气门板呈逗点状，背缘有明显几丁质增厚且具有珐琅彩；肢节4对，粗壮，背面有珐琅彩，Ⅳ肢节(股节、胫节和后跗节)具有3个腹齿(图 1J、K)。雌性成蜱(未饱血体长2.95 mm±2.00 mm，N＝50) 假头基呈矩形，基突不发达，背部具有孔区为雌性革蜱特有结构；盾板约占背部1/3，珐琅彩浓厚；生殖孔有翼状突，气门板逗点状背缘几丁质增厚，但表面珐琅彩不明显，肢节4对，Ⅳ肢节无腹齿(图 1L、M)。

2.2 银盾革蜱不同发育阶段超微形态

借助扫描电子显微镜观察, 发现该蜱各龄期肢节数量、假头基形状、刚毛形态、肛门瓣刚毛数量、气门板形态等存在特有的超微结构特点(图 2~5、表 1)；虫卵表面光滑，结构均一，长椭圆形，幼蜱破壁时主要依靠肢节的力量，由节肢先破除壁外，以倒退方式破除壳外(图 2A、B、C)；幼蜱假头基略似三角形，须肢各节界限不明显，腹面内侧缘刚毛仅一对(图 2G、F)；基节Ⅰ无内外距之分，仅略有突起(图 2I)；肛门处肛门瓣仅有一对刚毛，较长呈圆锥状，与体表麦穗状刚毛相区别(图 2L)；口下板齿式2|2(图 2F)；无肢节Ⅳ、生殖孔、气门板和肛后沟等(图 2D、E、H、K、L)。幼蜱经蜕皮后进入若蜱期，若蜱的肢节Ⅳ、气门板、肛后沟形成，但气门板处于未成熟阶段，无气门斑，生殖孔(图 3A、B、G、H、E)；假头基近似六边形，两侧横突逐渐变短(图 3C、D)；基节Ⅰ处的小突起分化成内外距，且间距较大(图 3E)；基节Ⅳ外距较短未达基节后缘，末端钝圆(图 3B)；肛门瓣由1对刚毛变为3对(图 3G)；口下板齿式3~2|2~3，前2排后延伸为3排(图 3D)。成蜱期银盾革蜱为雌雄异体，成蜱(雌雄)假头基两侧外缘平行，基突发达(图 4D，图 5C)；须肢各节界限明显，且内侧缘各节(单侧)刚毛数大于2根(图 4D、E，图 5C、E)；基节Ⅰ内外距紧密(图 4F，图 5F)；基节Ⅳ外距明显超出基节后缘(图 4B、J，图 5B)；刚毛整体为圆锥状表面光滑(图 4A、C、G、M，图 5C、G、M)。雄蜱肛瓣具有5对半刚毛(图 4I)；口下板齿式3|3(图 4E)；肢节Ⅳ(股节、胫节和后跗节)腹面具有3个的齿状突(图 4J)；生殖孔上覆盖有生殖帷(图 4H)；雌蜱肛瓣具有5对刚毛(图 5I)；口下板齿式4~3|3~4(图 5E)；肢节Ⅳ腹面无齿状突(图 5I)；生殖孔有翼状突(图 5H)。

3 讨论

银盾革蜱是主要的生物媒介，可携带和传播多种病原体，广泛分布于世界各地的半荒漠草原和灌丛，国内外有关该蜱的生活史、地理分布、生理组织、功能基因等方面具有报道^[16-20]，但关于超微形态结构方面研究报道较少，尤其是不同发育阶段超微形态结构，未见相关报道。

实验条件下银盾革蜱成蜱(雌雄未饱血)体长相近为2.30 mm±0.20 mm；自然条件下采集到的雄性(未饱血)成蜱体长为3.50 mm±2.00 mm，雌性(未饱血)成蜱为体长2.95 mm±2.00 mm，个体间体长相差较大，考虑到自然条件该蜱体长的确切性，统计值为自然条件下成蜱(雌雄)体长。新疆地区革蜱属中优势种革蜱具有5种^[14]，形态结构相似不易区分，本研究发现，其背部整体珐琅彩浓厚，褐斑中带有彩斑；气门板呈较长逗点状，具有几丁质增厚部；股节、胫节和后跗节腹面具有3个的齿状突，后跗节较短；哈氏器呈椭圆形，前窝呈梯形较浅，后囊呈横椭圆形，囊孔呈齿缝状，囊孔部具有矩形瓣膜；基节Ⅳ外距明显超出基节后缘，呈锥形……，根据这些特点可快速鉴别银盾革蜱。由于雌蜱饱血后形态易发生变形，外部特征不发达，且雌蜱相似度较高，因此，试验中多以雄蜱作为鉴别对象。

姜广仁和马立名对银盾革蜱同属的草原革蜱产卵、孵化及幼蜱蜕皮的进行了详细观察^[21]；逄春积等对银盾革蜱的产卵量、孵化率以及蜕皮率等进行了较系统的研究^[22]，但关于银盾革蜱各龄期发育特点方面尚未描述，笔者借助体视、扫描显微镜观察了银盾革蜱不同发育阶段，获得了其更为详细的结构特征信息。该硬蜱属于后沟类硬蜱扫描电镜下，虫卵(15~23 d)表面出现褶皱，末端形成弧状开口，由节肢先破除壁外，这与体视镜下的破壁现象相一致；幼蜱绝大部分刚毛分叉呈麦穗状，3对肢节，无气门板、肛后沟、孔区(雌)和生殖孔；若蜱少部分刚毛分叉呈麦穗状，无气门斑、孔区和生殖孔，该时期形成第Ⅳ肢节、气门板和肛后沟；成蜱刚毛整体为圆锥状，表面光滑，具有4对肢节、气门板、气门斑、孔区(雌)和生殖孔，这表明随着硬蜱的蜕皮刚毛由起初的麦穗状逐渐形成成熟的圆锥状，硬蜱体表刚毛的形成也需要一定的发育期，而口下板刚毛随着幼蜱的发育明显变短，这一现象国内外未见相关报道，也表明第Ⅳ肢节、气门板和肛后沟形成于若蜱阶段，而孔区(雌)和生殖孔于成蜱阶段形成。幼蜱无气门板，若蜱虽然具有气门板，但无气门斑，可推测幼蜱呼吸并非依靠气门板，若蜱的气门板处于过渡状态，可能起到辅助呼吸，幼蜱与若蜱的主要呼吸方式可能主要依靠体表；幼蜱由于肢节数量及硬度，其刚毛较长呈麦穗状，该结构可能起到增加其对宿主动物体表的附着力；蜱与蜘蛛都属于蛛形纲，幼虫期幼蜱肢节为3对，幼蛛肢节为4对，这种发育方式可有效缩短其卵的孵化期。

早期国外学者认为蜱类的幼蜱无盾窝，但随着科技进步，扫描电子显微镜被应用于蜱类鉴定，不同种类的蜱类的幼蜱以及若蜱表面盾窝被相继发现，但也有少部分蜱类的幼蜱不存在盾窝^[23-24]，本研究发现银盾革蜱幼蜱未见盾窝结构，而若蜱存在明显盾窝结构，这与国内学者李莹等关于银盾革蜱幼蜱研究结构存在一定的差异，后对大量幼蜱背部形态进行观察，未见明显盾窝结构，但也不排除处于幼蜱期银盾革蜱该结构可能被相互堆积的体表褶皱所掩盖且发生形变，不易观察；幼蜱与若蜱期的盾板结构与雌蜱相似，盾板占背部整体约1/3，且未表现性别特征，而蜱类性别由其染色体数量决定^[25]，因此，幼蜱与若蜱期性别通过形态特征很难区分，幼蜱与若蜱的性别区分，将在下一步的研究进行。

4 结论

本研究以革蜱属银盾革蜱为模式种，并初次描述了其各龄期超微结构及发育过程，对不同龄期该硬蜱的气门板、刚毛、盾窝腺、哈氏器等结构的发育方式进行分析，补充完善银盾革蜱的形态及生物学相关参数的同时，也为革蜱类硬蜱的各发育阶段及其传播疾病的全面防治提供一定超微形态学方面的实验依据。